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腫瘍抗原の分子免疫学的研究

肿瘤抗原的分子免疫学研究

基本信息

批准号：
63614503
负责人：
谷口克
金额：
$ 10.88万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63614503/
关键词：
ガン抗原メラノーマメラノーマ関連遺伝子 DNA結合蛋白

项目摘要

腫瘍抗原発現機構とその関連遺伝子発現を、腫瘍化との関連において検討。1.がん抗原の新しい概念の確立:(1)種属共通メラノーマ糖鎖抗原性の発現一種属共通メラノーマ抗原の一次構造を解析正常GM3と全く同一であったが、正常GM3でも密度が10mol%以上になるとメラノーマ抗原性が出現することをモノクローナル抗体、キラーT細胞および抑制T細胞系を用いて証明した。これは一次構造が正常と同一でも立体構造上の変異でガン抗原性が出現する最初の事例となりがん抗原性獲得の新しい概念を確立した。(2)メラノーマ抗原発現機序の新知見-GM3密度を上昇させ、メラノーマ抗原性を発現させる機構として蛋白分子の存在が示唆された。その候補蛋白の解析精製を抗体を用いて行った。抗体M622/M562はキラーT細胞のエピトープを認識する。(a)この分子は80kdの糖蛋白で18kdの蛋白と非共有結合している。(b)80kdは分泌されているが分泌には18kd分子との結合が必要。(c)抗体で精製した物質は抗メラノーマ抑制T細胞を誘導できる。(d)100gのB16腫瘍から2DEにより120ug相当の精製蛋白を得、アミノ酸配列を行っている。2.メラノーマ関連遺伝子:Zn-binding finger構造をもつ新しいDNA結合蛋白-トランスフォーメーションに関与するゲノムDNAをクローン化したがその活性に一致した部位からDNAを単離構造を解析した。(a)cDNAは全長1.605bpで1.026bpのopen reading frameを持つ。(b)342アミノ酸からなる蛋白でN末端に2ケのZn-binding finger構造をもちC末端にはセリン-スレオニンに富み3ケ所のAキナーゼによるリン酸化部位をもつ。この分子に対するペプチドを化学合成し抗体を作成。ウエスタンブロット法で核分画に36kdの蛋白を検出、蛍光抗体法で核内に局在することを確認。またこの蛋白はDNAに結合し、0.5MNaClにより溶出されることを確認した。(d)検索したすべての腫瘍でこの分子の発現が陽性であったが正常組織ではほとんど陰性で、神経細胞とスペルマトゴニアのみ陽性であり、腫瘍化との関連が示唆された。

The mechanism of tumor antigen development and the relationship between tumor antigen development and tumor differentiation are discussed. 1. Establishment of the new concept of antigen:(1) The development of a common species of antigen: the primary structure of a common species of antigen. The analysis of normal GM3 and the whole identity of the antigen. The density of normal GM3 is more than 10 mol %. This is the first case of antigenicity acquisition and the establishment of a new concept of antigenicity acquisition. (2)New knowledge of antigen development mechanism-GM3 density increase, antigenicity development mechanism and protein molecule existence The candidate protein was analyzed and purified. Antibody M622/M562 is recognized by T cells. (a)This molecule is an 80kd glycoprotein and an 18kd protein. (b)80kd secretion and 18kd molecule binding are necessary. (c)Antibodies are purified to inhibit T cell induction. (d)100g of B16 protein was obtained by 2DE and 120ug of purified protein was obtained by acid sequencing. 2. DNA binding protein:Zn-binding finger structure analysis of DNA binding protein: DNA binding protein analysis of DNA binding protein: Zn-binding finger structure analysis of DNA binding protein (a)cDNA is 1.605bp long and has an open reading frame of 1.026bp. (b)342 α-amino-2-amino-3-amino-4-amino-3-amino-3-amino-4-amino-4-amino-3-amino-4-amino-4-amino-5-amino-4-amino-5-amino-5-amino-4-amino-5-amino-4-amino-4-amino-5-amino-4-amino-5-amino-amino-4-(3-amino-amino-amino)-3-amino-amino- The molecule is chemically synthesized. 36kd protein was detected by nuclear analysis method and confirmed by fluorescent antibody method. This protein binds to DNA and is dissolved in 0.5M NaCl. (d)The expression of these molecules is positive in normal tissues, negative in neurons, and positive in tumors.