权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

EBウイルス潜伏感染機構とウイルス増殖感染機構の解析

EB病毒潜伏感染机制与病毒生产性感染机制分析

基本信息

批准号：
15019130
负责人：
鶴見達也
金额：
$ 3.33万
依托单位：
Aichi Cancer Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15019130/
关键词：
EBV 細胞周期

项目摘要

Epstein-Barr Virus (EBV)は、通常静止期にあるBリンパ球に感染し、細胞周期を回転させ、Bリンパ球は分裂増殖を始める。EBV感染B細胞はウイルス産生はせず、潜伏感染状態にある。本研究は(1)潜伏感染EBVゲノム複製機構(2)溶解感染EBVゲノム複製機構(3)潜伏感染からの再活性化の全体像の機構解明の3つを研究目標においている。これまでの我々の解析からEBV潜伏感染B細胞に溶解感染を誘導するとS期様細胞環境、即ちRB蛋白質が高リン酸化状態となる細胞環境下で溶解感染が遂行されることを報告した(Kudoh et al. J.Virol.77:851-861.2003)。Epstein-Barr virus潜伏感染Bリンパ球細胞に溶解感染を誘導するとRB蛋白質は高リン酸化されS-phase likeの環境に至る。S期CDK活性を薬剤(Purvalanol A, Roscovitin)で抑制しRB蛋白質を低リン酸化状態にし細胞周期を強制的にG1/G2期にした状態でウイルス複製感染へ与える影響を検討した。Tet-BZLF1/B95-8細胞にDoxycyclineを添加しBZLF1蛋白質を強制発現させたが、CDK阻害剤存在下ではウイルスDNA複製は著しく抑制されることが明らかとなった。さらに、CDK阻害剤の効果は添加する時期により大きく異なり、一旦ウイルスDNA複製が始まった細胞にははとんど影響無くウイルスDNA合成が観察された。CDK阻害剤添加により最早期、早期ウイルス蛋白質の発現が著しく抑制されることが観察され、さらにノザンブロット解析を行ったところ、CDK阻害剤存在下ではEBVのウイルス複製関連因子を含む溶解感染蛋白質群の転写が阻害されていることが明らかとなった。以上よりS期CDK活性により構築される細胞内環境は、EBV溶解感染遺伝子群の発現に必要であることが明らかとなった(Kudoh et al. J.Virol.in press)。S期様細胞環境ではRbから遊離された活性型E2FあるいはE2Fにより発現増強されるSp1などの転写因子が最早期、早期ウイルス蛋白質の発現に必須であると考えられる。

Epstein-Barr Virus (EBV) is a virus that infects cells during the normal quiescent phase, and causes cell cycle regression and mitosis. EBV infection of B cells is caused by latent infection. This study includes: (1) latent infection EBV replication mechanism;(2) lysis of EBV replication mechanism;(3) elucidation of latent infection EBV reactivation mechanism; and (3) objective of the study. This analysis of EBV latent infection of B cells, induction of lytic infection, and cellular environment, i.e., high levels of RB protein in the acidic state of the cell, is reported (Kudoh et al. J.Virol.77:851-861.2003). Epstein-Barr virus latently infects B cells and induces lytic infection. RB protein is highly acidified and S-phase like in the environment. Purvalanol A (Roscovitin) inhibits CDK activity and inhibits RB protein production in the G1/G2 phase of the cell cycle. Tet-BZLF1/B95 -8 cells were exposed to Doxycycline and CDK inhibitors to inhibit DNA replication. CDK inhibitors are effective at increasing DNA synthesis in cells, but they are not effective once DNA replication begins. CDK inhibitor is added to inhibit the expression of EBV proteins in the earliest and early stages. In the presence of CDK inhibitor, EBV replication-related factors are included in the inhibition of the expression of EBV proteins. The cellular environment for CDK activity in S phase is constructed, and EBV lysis is necessary for the development of infectious subpopulation (Kudoh et al. J.Virol.in press). The cell environment in S phase is different from that in Rb phase, and the active E2F phase is different from that in E2F phase.