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DNA鎖合成装置のモデル系:ウイルスゲノム複製伸長を担う蛋白質群の機能解析

DNA链合成装置模型系统：负责病毒基因组复制和延伸的蛋白质的功能分析

基本信息

批准号：
08277211
负责人：
鶴見達也
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08277211/
关键词：
Epstein-Barr virus DNA polymerase Single stranded DNA-binding protein

项目摘要

Epstein-Barrウイルス産生状態においては複製開始領域Ori Lytから複製は始まり少なくとも複製後期にはローリングサークル型複数様式によりウイルスゲノムは複製され複製中間体としてhead-to-tail concatemerが合成される。研究目的はこのローリングサークル型DNA合成機構を明らかにすることであり、複製フォークで働く蛋白質の個々の機能及び相互作用を解析することである。このウイルスゲノム複製伸長を担うウイルス蛋白質としてBALF5蛋白質、BMRF1蛋白質、BALF2蛋白質、BBLF4蛋白質、BBSLF1蛋白質、BBLF2/3蛋白質が知られている。これまでBALF5蛋白質がPolymerase catalytic subunit, BMRF1蛋白質がPolymerase accessory subunitであることを明らかにしてきた。平成8年度においてはBALF2蛋白質について解析した。BALF2遺伝子をウイルスDNAからクローニングし大腸菌で発現させBALF2蛋白質を精製し、兎に注射してこうBALF2蛋白質抗体を作成した。この抗体を用いたウエスタンブロット法によりEBV産生Bリンパ球よりBALF2蛋白質を各種カラムを通して精製した。精製されたBALF2蛋白質は、MW130kであり一本鎖DNA結合活性をもっていた。primed M13 ssDNAをtemplate-primerとしたEBVDNAポリメラーゼ複合体によるDNA合成系ではBALF2蛋白質はtemplate上に形成される二次構造を解消するように働きDNAポリメラーゼがtemplate上を動きやすくなるように働くことが推定された。BALF2蛋白質は一本鎖DNA結合蛋白質として働くことを明らかにした(Virology 222:352-364,1996)。次にEBVDNAポリメラーゼ複合体には弱いながらStand displacement DNA 合成活性があることを見つけた。primed M13 ssDNAの系にEBVDNAポリメラーゼ複合体をいれるとFull lengthより長いDNAが合成されることが確認された。mung bean nuclease処理により生成産物の長さは7.2kbにまで削られた。また,ATP,ATPγ-Sによってstrand displacement活性は影響されなかった。EBV DNA polホロ酵素のcatalyticサブユニットであるBALF5蛋白質,アクセサリーサブユニットのBMRF1蛋白質をin vitroで再構成させた場合もEBV DNA polホロ酵素の場合とほぼ同様の結果が得られた。この結果は現在投稿中である。

Epstein-Barr: The state of production is the beginning of replication. Ori Lyt: The beginning of replication is the beginning of replication. The end of replication is the end of replication. Objective: To clarify the mechanism of DNA synthesis and analyze the function and interaction of protein. BALF5 protein, BMRF1 protein, BALF2 protein, BBLF 4 protein, BBSLF 1 protein, BBLF2/3 protein are known to be involved in replication and elongation. BALF5 protein is a Polymerase catalytic subunit, BMRF1 protein is a Polymerase accessory subunit. HEI SEI 8 YEAR BALF2 PROTEIN BALF2 protein is purified and injected into the body to produce antibodies against BALF 2 protein. The antibody is used to produce B-type protein and B-type protein. Purified BALF2 protein, MW130k, DNA binding activity Primed M13 ssDNA template-primer and EBV DNA complex formation DNA synthesis system BALF2 protein template formation secondary structure decomposition DNA template activation BALF2 protein is a locked-DNA binding protein (Virology 222:352- 364, 1996). Next, EBV DNA complex is weak, stand displacement DNA synthesis activity is weak, Stand displacement DNA synthesis activity is weak, stand displacement DNA synthesis activity is weak. Primed M13 ssDNA and EBV DNA complex The mung bean nucleotide process produces a 7.2kb fragment. ATP,ATPγ-S and strand displacement activities are affected. EBV DNA pol enzyme catalytic enzyme BALF5 protein, BMRF1 protein in vitro reconstitutions, EBV DNA pol enzyme in vitro reconstitutions The result is now posted in.