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DNA鎖合成装置のモデル系:ローリングサークル型複製伸長を担う蛋白質群の機能解析

DNA链合成装置模型系统：负责滚环复制和延伸的蛋白质的功能分析

基本信息

批准号：
09266207
负责人：
鶴見達也
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Aichi Cancer Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09266207/
关键词：
Epstein-Barrウイルス DNAポリメラーゼ SSB DNA複製

项目摘要

Epstein-Barrウイルス産生状態においては複製開始領域OriLytから複製は始まり少なくとも複製後期にはローリングサークル型複製様式によりウイルスゲノムは複製され複製中間体としてhead-to-tail concatemerが合成される。研究目的はこのローリングサークル型DNA合成機構を明らかにすることであり、複製フォークで働く蛋白質の個々の機能及び相互作用を解析することにある。このウイルスゲノム複製伸長を担うウイルス蛋白質としてBALF5蛋白質、BMRF1蛋白質、BALF2蛋白質、BBLF4蛋白質、BSLF1蛋白質、BBLF2/3蛋白質が知られている。これまでBALF5蛋白質がPolymerase catalytic subunit,BMRF1蛋白質がPolymerase accessory subunitであることを明らかにしてきた。平成9年度においては一本鎖DNA結合蛋白質(EBVSSB、BALF2蛋白質)を大量に得、その性状を解析するために組み換えバキュロウイルスによる発現系を開発し、発現蛋白質を精製し、EBVSSBにhelix-destabilizing活性が付随することを見出した。このunwinding活性は抗BALF2蛋白質抗体により阻害された。最大活性はBALF2蛋白質がDNA基質を飽和する以上の濃度で得られた。BALF2蛋白質によるunwindingはcooperativeであり且つ非常に早く又unwinding活性に方向性は見られなかった。BALF2蛋白質のhelix-destabilizing活性がssDNA上の二次構造を解消することによりEBVDNAポリメラーゼの動きを促進すると考えられる。又EBVDNAポリメラーゼ複合体には弱いながらStrand displacement DNA合成活性があることを見つけた。

Epstein-BarrウイルスGeneration StatusにおいてはCopy Start FieldOriLytからCopyはstartまり小なくともCopy Later stage にはローリングサークル type copy 様style によりウイルスゲノムは copy され copy intermediate としてhead-to-tail concatemerが合される. Purpose of research , Copy the individual functions of proteins and analyze their interactions. BALF5 protein, BMRF1 protein, BALF2 protein, BBLF4 protein, BSLF1 protein, BBLF2/3 protein, and BBLF2/3 protein.これまでBALF5 protein がPolymerase catalytic subunit, BMRF1 protein がPolymerase accessory subunit であることを明らかにしてきた. In 2009, a large amount of DNA-binding proteins (EBVSSB, BALF2 protein) were analyzed, and a large number of DNA-binding proteins were analyzed.イルスによる発行を开発し, 発appearprotein をrefinedし, EBVSSBにhelix-destabilizing activity が氙ることを见出した. The unwinding activity of the anti-BALF2 protein antibody is blocked by the anti-BALF2 protein antibody. The maximum activity is achieved by saturating the BALF2 protein and the DNA matrix at a concentration above that level. The BALF2 protein is unwinding and cooperative, and it is very early and has unwinding activity and directionality. BALF2 protein has a helix-destabilizing activity and is a secondary structure on ssDNA. Also, the EBVDNA DNA complex is weak and the Strand displacement DNA synthesis activity is low.