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EBウイルス陽性がん細胞内におけるウイルスゲノム複製及び保持機構の解析

EB病毒阳性癌细胞中病毒基因组复制和保留机制分析

基本信息

批准号：
13214123
负责人：
鶴見達也
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Aichi Cancer Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13214123/
关键词：
Epstein-Barr Virus DNA複製 DNAポリメラーゼウイルス感染症癌酵素ゲノム

项目摘要

本研究は1)EBVゲノムが腫瘍細胞の核で複製維持される機構 2)ウイルスが産生される際のゲノムの複製機構の解明を研究目標においている。1)ORC蛋白質複合体等染色体複製開始の制御に関わる蛋白質がEBVゲノムと相互作用することが極最近報告されたが、その基礎的解析として染色体複製開始制御に関与する蛋白質であるMCM蛋白質群あるいはCDC6蛋白質,ORC蛋白質複合体等の細胞周期を通した動態を検討した。我々はhMCM蛋白質が6量体を形成すること、又MCM複合体の染色体への結合はおそらくリン酸化によりcdc2によって負に制御されることを示した。hCDC6の蛋白質の量は細胞周期を通じてそれほど変化せずG1期では核に検出された。hCDC6の一部は核構造に強く結合しS期では大部分が細胞質に検出された。しかし核構造に結合したhCDC6の量はほとんど変わらず、G2/M期ではcdc2/cyclinBによって高リン酸化された。hCDC6はhMCMとは異なる制御を受けておりEBV染色体上の結合部位も異なると考えられる。2)一方、Epstein-Barrウイルス産生状態においては複製開始領域OriLytから複製は始まり少なくとも複製後期にはローリングサークル型複製様式によりウイルスゲノムは複製される。このウイルスゲノム複製伸長を担うウイルス蛋白質としてBALF5蛋白質、BMRF1蛋白質、BALF2蛋白質、BBLF4蛋白質、BSLF1蛋白質、BBLF2/3蛋白質が知られている。DNAヘリカーゼ、DNAプライマーゼ活性を担うと考えられるBBLF4蛋白質、BSLF1蛋白質、BBLF2/3蛋白質は感染細胞内で複合体を形成していることを明らかにした。また各蛋白質間でも複合体形成をすることが確認できた。さらにEBVDNAポリメラーゼホロ酵素とこのヘリカーゼ/プライマーゼ複合体が相互作用していることを証明した。EBV複製フォークでこれらの複製蛋白質はウイルスDNA複製装置を形成してローリングサークル型複製を行なっていると想定される。

In this study, 1) EBV cells were copied and maintained. 2) there was no significant difference between the two groups in this study. 1) chromosome replication, such as ORC protein syntheses, begins to control the interaction between proteins, proteins, EBV proteins, proteins We use hMCM protein to measure the body weight to form a virus, and MCM complex to combine chromosome DNA with DNA to acidify it. To cdc2 it, we need to make it possible to control it. HCDC6, protein, protein, cell cycle, cell cycle and cell cycle. In hCDC6, most of the cells in the period of S were found to be affected by the use of nuclear equipment. The combination of HCDC6, G2