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DNA鎖合成装置のモデル系:EBV複製フォークで働く蛋白質群の機能解析

DNA链合成装置的模型系统：作用于EBV复制叉的蛋白质的功能分析

基本信息

批准号：
10162215
负责人：
鶴見達也
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Aichi Cancer Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10162215/
关键词：
Epstein-Barrウイルス DNA複製

项目摘要

Epstein-Barrウイルス産生状態においては複製開始領域OriLytから複製は始まり少なくとも複製後期にはローリングサークル型複製様式によりウイルスゲノムは複製され複製中間体としてhead-to-tail concatemerが合成される。このウイルスゲノム複製伸長を担うウイルス蛋白質としてBALF5蛋白質、BMRF1蛋白質、BALF2蛋白質、BBLF4蛋白質、BSLF1蛋白質、BBLF2/3蛋白質が知られている。これまでBALF5蛋白質がPolymerase catalytic subumit,BMRF1蛋白質がPolymerase accessory subunitであることを明らかにした。平成10年度においては一本鎖DNA結合蛋白質(EBVSSB)にhelix-destabilizing活性が付随することを見い出した。このhelix-destabilizing活性がssDNA上の二次構造を解消することによりEBVDNAポリメラーゼの動きを促進すると考えられる。さらにDNAヘリカーゼ、DNAプライマーゼ活性を担うと考えられるBBLF4蛋白質、BSLF1蛋白質、BBLF2/3蛋白質のバキュロウイルス発現系を各々樹立した。3種の組み換えバキュロウイルスは感染細胞中に各々90、89、及び76kの蛋白質を発現し、各抗体を用いたウエスタンブロットにより各遺伝子産物であることが同定された。3種の組み換えバキュロウイルスを同時に感染させ抗BSLF1抗体で免疫沈降させるとBSLFl、BBLF4, BBLF2/3蛋白質すべてを沈降させた。感染細胞内で3者は複合体を形成している。また同様の方法でBBLF4蛋白質/BSLF1蛋白質問、及びBBLF2/3蛋白質/BSLF1蛋白質間でも複合体形成をすることが確認できた。現在この複合体を精製し、その酵素活性について検討している。

Epstein-Barr: The state of production of Epstein-Barr: BALF5 protein, BMRF1 protein, BALF2 protein, BBLF 4 protein, BSLF 1 protein, BBLF2/3 protein are known to be involved in replication and elongation. BALF5 protein is a polymerase catalytic subunit,BMRF1 protein is a polymerase accessory subunit. In 2010, the helix-destroying activity of EBVSSB was detected. This helix-destabilizing activity dissolves secondary structures on ssDNA, which may promote the movement of EBVDNA molecules. The development of BBLF4 protein, BSLF1 protein and BBLF2/3 protein was established separately. Three different groups of proteins were detected in infected cells, and the protein products of 90, 89, and 76k were detected in each antibody. Three different groups of BSLF1, BBLF4 and BBLF2/3 proteins were detected simultaneously. 3-part complex is formed in infected cells. The same method was used to confirm the formation of BBLF4 protein/BSLF1 protein complex and BBLF2/3 protein/BSLF1 protein complex. Now the complex is refined and the enzyme activity is detected.