白血病細胞のdormancy誘導におけるFKHRL1転写因子の役割

FKHRL1转录因子在白血病细胞休眠诱导中的作用

• 批准号: 15024257
• 负责人: 小松 則夫
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15024257/
• 关键词: FKHRL1; dormancy; 薬剤耐性; siRNA; STI571

我々はこれまでにFKHRL1がエリスロポエチンやトロンボポエチンなどのサイトカイン刺激によってリン酸化され、核から細胞質へ移行し、転写活性化能を失うこと(Blood 96:941,2000;JBC 276:15082,2001)、核内移行型(活性型) FKHRL1cDNA導入によって細胞回転がG0/G1期で停止し、in vitroの系において正常血液幹細胞の増殖・分化を著しく阻害することを明らかにした。さらに慢性骨髄性白血病(CML)由来の細胞株ではFKHRL1が恒常的にリン酸化されており、BCR-ABLチロシンキナーゼ特異的インヒビターであるSTI571処理によってリン酸化が減弱することから、CML細胞ではFKHRL1は不活性型として細胞質内に存在し、STI571によるBCR-ABLチロシンキナーゼ抑制によって核内に移行し、転写因子としての機能を発揮することが推測された。内因性にbcr-ablを発現しているCML由来の白血病細胞株KCL22に活性型FKHRL1-エストロゲン受容体融合遺伝子(FKHRL1-ER)を遺伝子導入し、TAM誘導システムを樹立した(JBC 278:6411,2003)。TAM添加によって核内にFKHRL1を強制発現させたところ、3日目には細胞のほとんどがアポトーシスによって死滅した。このことはFKHRL1を分子標的にした新たな治療法へと発展できる可能性を示唆している。そこで、FKHRL1-ERトランスフェクタントおよびベクターのみを導入されたコントロール細胞株をヌードマウスの皮下に接種し、腫瘍形成後にTAMを投与した。トランスフェクタントではTAM投与群でday2〜day7の腫瘍体積に有意な差(p<0.05)があることがわかった。一方、親株ではタモキシフェン投与による腫瘍の縮小効果は認めなかった。さらに優位抑制型FKHRL1遺伝子導入細胞株およびベクターのみを導入されたコントロール細胞株をヌードマウスの皮下に接種し、腫瘍形成能を検討した。優位抑制型FKHRL1遺伝子導入細胞株では親株に比して、腫瘍形成能の著しい低下を認めた。これらの実験結果はFKHRL1を分子標的とした白血病の新たな治療法開発へと展開できることを示唆している。

I 々 は こ れ ま で に FKHRL1 が エ リ ス ロ ポ エ チ ン や ト ロ ン ボ ポ エ チ ン な ど の サ イ ト カ イ ン stimulus に よ っ て リ ン acidification さ れ, nuclear か ら cytoplasm へ transitional し, planning can write activeness を lost う こ と (96-941200 "0; JBC 1), 276-15082200 in nuclei transitional type (activity type) FKHRL1cDNA import に よ っ て cells back to planning が G0 / G1 phase で stop し, the in vitro の is に お い て normal blood stem cells, differentiation を の raised colonization with し く resistance against す る こ と を Ming ら か に し た. さ ら に chronic bone marrow leukemia (CML) origin の cell lines で は FKHRL1 が constant に リ ン acidification さ れ て お り, BCR - ABL チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ specific イ ン ヒ ビ タ ー で あ る STI571 処 Richard に よ っ て リ ン acidification が abate す る こ と か ら, CML cells で は FKHRL1 は not active type と し て is fine Within the cytoplasm に し, STI571 に よ る BCR - ABL チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ inhibit に よ っ て in nuclei に transitional し, planning to write factor と し て の function を 発 swing す る こ と が speculation さ れ た. Endogenous に BCR - abl を 発 now し て い る CML origin の leukemia cell lines KCL22 に activity type FKHRL1 - エ ス ト ロ ゲ ン heritage by let body fusion 伝 child (FKHRL1 - ER) を heritage 伝 import し, TAM induced シ ス テ ム を set し た (JBC 3 278-6411200). TAM add に よ っ て in nuclei に FKHRL1 を forced 発 now さ せ た と こ ろ, 3 eyes に は cells の ほ と ん ど が ア ポ ト ー シ ス に よ っ て die out し た. こ の こ と は FKHRL1 を molecular mark に し た new た な therapy へ と 発 exhibition で き を る possibility in stopping し て い る. そ こ で, FKHRL1 - ER ト ラ ン ス フ ェ ク タ ン ト お よ び ベ ク タ ー の み を import さ れ た コ ン ト ロ ー ル cell lines を ヌ ー ド マ ウ ス の subcutaneous に vaccination し, swollen sores に after the formation of TAM を cast with し た. ト ラ ン ス フ ェ ク タ ン ト で は cast with TAM group で day2 ~ day7 の swollen sores に intentionally な volume difference (p < 0.05) が あ る こ と が わ か っ た. The effect of one party, the parent strain で, タモキシフェ, タモキシフェ, and による in reducing the size of the abscess is confirmed to be めな, めな, った. さ ら に primacy of inhibitory FKHRL1 posthumous son 伝 import cell lines お よ び ベ ク タ ー の み を import さ れ た コ ン ト ロ ー ル cell lines を ヌ ー ド マ ウ ス の subcutaneous に vaccination し, swollen sores can form を beg し 検 た. The superior inhibitory FKHRL1 progeny 伝 introduced into the cell line で the に parent line に shows a <s:1> lower を recognition めた than the <s:1> て and ulcer formation. こ れ ら の be 験 results は FKHRL1 を molecular mark と し た leukemia の new た な therapy open 発 へ と expand で き る こ と を in stopping し て い る.

项目成果

Itoh, A: "Thrombopoietin upregulates nucleolin mRNA and protein in thrombopoietin-dependent megakaryocytic cell line, UT-7/TPO."Mol Cell Biochem. 247(1-2). 75-82 (2003)

Itoh, A：“血小板生成素上调血小板生成素依赖性巨核细胞系 UT-7/TPO 中的核仁素 mRNA 和蛋白质。”Mol Cell Biochem。

Ito, T: "A soluble CAR-SCF fusion protein improves adenoviral vector mediated gene transfer to c-Kit-positive hematopoietic cells."J Gene Medicine. 5. 929-940 (2003)

Ito, T：“可溶性 CAR-SCF 融合蛋白改善了腺病毒载体介导的基因向 c-Kit 阳性造血细胞的转移。”J Gene Medicine。

Uchida, M: "EPO overcomes STI571-induced apoptosis and induces erythroid differentiation in TF-1/bcr-abl cells."Stem Cells. (in press).

Uchida, M：“EPO 克服了 STI571 诱导的细胞凋亡并诱导 TF-1/bcr-abl 细胞中的红系分化。”干细胞。

Nagai, T: "Oxidative stress is involved in hydroxyurea-induced erythroid differentiation."Br J Haematol. 121(4). 657-661 (2003)

Nagai, T：“氧化应激参与羟基脲诱导的红细胞分化。”Br J Haematol。

Tarumoto, T: "Ascorbic acid restores sensitivitiy to imatinib via suppression of Nrf2- dependent gene expression in the imatinib-resistant cell line."Exp.Hematol. (in press).

Tarumoto, T：“抗坏血酸通过抑制伊马替尼耐药细胞系中的 Nrf2 依赖性基因表达来恢复对伊马替尼的敏感性。”Exp.Hematol。