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FKHRL1転写因子の機能解析と血液疾患モデルの樹立

FKHRL1转录因子功能分析及血液病模型建立

基本信息

批准号：
13216092
负责人：
小松則夫
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13216092/
关键词：
Forkhead転写因子 FKHRL1 UT-7 EPO GATA-1 細胞周期赤血球造血巨核球造血

项目摘要

Forkhead転写因子FKHRL1の造血における機能を明らかにするために、ヒト臍帯血由来CD34陽性細胞への活性型FKHRL1cDNA遺伝子導入実験を行った。その結果、形成される赤芽球コロニーおよび顆粒球・マクロファージコロニーの数が有意に減少した。さらにUT-7/EPO細胞株を用いてタモキシフェンで活性化FKHRL1を核内に誘導できる系を確立した。その結果、タモキシフェンを添加すると細胞周期はG0/G1期で停止した。以上の結果からFKHRL1が造血幹細胞の増殖や分化に、細胞周期の制御を介して、何らかの役割を果たしていることが示唆された。さらに赤芽球・巨核球系に特異的に発現する転写因子GATA-1の発現調節領域の下流に活性化FKHRL1を連結させたコンストラクトを作製し、トランスジェニックマウスを樹立した。血小板数、ヘモグロビン値、骨髄中の巨核球、赤芽球系前駆細胞数は共に正常範囲であった。今後はこれらの値をモニターしながら造血障害発症の有無について観察を続け、さらに放射線や抗癌剤による骨髄抑制後の赤血球や巨核球・血小板回復への影響を検討し、赤芽球や巨核球系前駆細胞の増幅におけるFKHRL1の役割を解析する予定である。DNAチップを用いて、タモキシフェン添加後の遺伝子発現パターンをタモキシフェン添加前と比較検討し、両者で発現の異なる遺伝子を検出したので、今後はreal-time PCRにて定量化を行い、FKHRL1の標的遺伝子の可能性を検討する予定である。

The function of Forkhead transcription factor FKHRL1 in hematopoiesis is clearly demonstrated, and the introduction of active FKHRL1 cDNA into umbilical cord blood derived from CD34-positive cells is carried out. The number of cells in a cell is intentionally reduced. In addition, UT-7/EPO cell line was established with the activation of FKHRL1 in the nucleus. As a result, the cell cycle stops at G0/G1. These results indicate that FKHRL1 is involved in the proliferation and differentiation of hematopoietic stem cells, the regulation of cell cycle, and the regulation of cell cycle. In addition, the activation of FKHRL1 in the downstream of the production regulatory domain of the gene GATA-1 is linked to the production of the gene GATA-1. Platelet count, cell count, megakaryocyte count, erythroid count were all normal. In the future, we will investigate the effects of radiation and anticancer agents on erythrocyte, megakaryocyte and platelet recovery after bone marrow suppression, and determine the role of FKHRL1 in the amplification of erythrocytes and megakaryocytes. DNA fragments were detected after DNA fragment addition, compared before DNA fragment addition, detected after DNA fragment addition, quantified by real-time PCR in the future, and discussed the possibility of FKHRL1 target fragment detection.