Rhoファミリータンパク質の正確な細胞内局在の決定とがん化に伴う変化の解析

确定 Rho 家族蛋白的精确亚细胞定位并分析与癌变相关的变化

• 批准号: 15024267
• 负责人: 米村 重信
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15024267/
• 关键词: Rho; Rac; Cdc42; 形態形成; がん化; 局在; 細胞質分裂; 低分子量Gタンパク

本研究は、低分子量Gタンパク質、Rhoファミリーの細胞、組織における局在の信頼性高い解析を可能にする、特異抗体、固定法を確立し、それを利用して、形態形成時におけるRhoファミリータンパク質の正確な挙動、各組織における局在の情報から機能との関連を探り、がん化にともなう変化の有無を調べることを目的としている。本年度は、Rhoに関しての基礎的な研究が終了し、Rac,Cdc42に関しては足がかりができた。1すでに確立した抗体(RhoA特異的なものとRhoA,RhoCに特異的なもの)、固定法を用いて、各組織における局在の詳細を決定した。また、培養細胞を用いて、Rhoの活性化時にRhoの細胞質から細胞膜への移行を明瞭に可視化することができた。また、細胞周期を通じてのRhoの局在変化を詳細に解析した。その結果細胞質分裂時の分裂面決定の時期に、Rhoが分裂溝域に濃縮することがわかった。この濃縮は、分裂面決定に必要な微小管に依存しており、またRhoの活性が細胞質分裂に必要であるという報告と考え合わせると、Rhoの濃縮は分裂面決定における重要なステップであると考えられた。RhoA,B,Cそれぞれに特異的な抗体の作製を試みているが、ウェスタンブロット、免疫染色が共に可能な抗体の作製は今のところ成功していない。2Rac,Cdc42に関しては、市販されている抗体の中に、ウェスタンブロット、免疫染色が共に可能な抗体があることが判明した。また、そのために必要な固定条件も決定することができた。しかし、Rhoと比較すると、培養細胞、ほ乳類組織などで特徴的な分布を示さなかった。非常にドラスティックな形態形成運動が起こる、胚発生に焦点を当てて、局在を検討したところ、上皮の管形成時にはその頂端部に強い濃縮が見られ、現在、その場所での機能を解析している。

In this study, low molecular weight G-linked immunosorbent assay (LMWG), Rho low molecular weight (LMW), low molecular weight ( There is no reason why there is no reason for this to happen. This year, Rho has completed the study of the foundation, and the Rac,Cdc42 has made full use of it. 1. Make sure the specific antibody (RhoA specific antibody RhoA, RhoC specific antibody), use the fixation method, and determine the antibody of each organization in the laboratory. When the cells were activated by Rho and Rho, it was clear that the membrane of Rho cells could be activated. The cell cycle and the cell cycle are being analyzed by the Rho Bureau. Results the time period was determined by the cleavage plane when the cell was divided, and the Rho domain was divided. The necessary microtubule dependence, the Rho activity, the cell division, the necessary microtubule, the cleavage plane, the Rho, the cleavage plane, the microtubule, the microtubule, the cell, the cell, the cell It is possible that the antibody of the RhoA,B,C antibody may be used as the antibody in the diagnosis of the disease. 2RacCoCoCdc42antibodies, market antibodies, antibody antibodies, immunostaining and immunostaining may be positive. The necessary fixed conditions determine whether or not to pay attention. The distribution of the characteristics of tissue culture, culture, and milk is shown in comparison with that of Rho. It is very important that the formation of the system is very important, the focus of the embryo is very important, and the end of the tube is strongly affected during the formation of the epithelial tube.

项目成果

K.Hamada, T.Shimizu, S.Yonemura, Sh.Tsukita, Sa.Tsukita, T.Hakoshima.: "Structural basis of adhesion-molecule recognition by ERM proteins revealed by the crystal structure of the radixin-ICAM-2 complex."EMBO J. 22. 502-514 (2003)

K.Hamada、T.Shimizu、S.Yonemura、Sh.Tsukita、Sa.Tsukita、T.Hakoshima.：“radixin-ICAM-2 复合物的晶体结构揭示了 ERM 蛋白粘附分子识别的结构基础。

S.Yonemura, K.Hirao-Minakuchi, Y.Nishikura: "Rho localization in cells and tissues."Exp.Cell Res.. (In press). (2004)

S.Yonemura、K.Hirao-Minakuchi、Y.Nishikura：“Rho 在细胞和组织中的定位。”Exp.Cell Res..（正在出版）。