細胞骨格と膜蛋白質とのERM蛋白質を介した相互作用の解析

通过 ERM 蛋白分析细胞骨架和膜蛋白之间的相互作用

基本信息

批准号：
08770085
负责人：
米村重信
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770085/
关键词：
ERM アクチン繊維微絨毛 CD43 CD44 ICAM-2

项目摘要

ERM蛋白質が結合する膜蛋白質の細胞貿領域の特徴が塩基性アミノ酸に富むことであるとを、CD43,CD44を用いて推定してきたが、本年は、同じ特徴をもつICAM-2,IL-2レセプターαからもそれを支持する実験結果を得た。ERM蚤自質の一つであるエズリンと分布が一致するという報告のある膜蛋白質、ICAM-2の細胞貿領域をGSTとの融合蛋白質として大腸菌において、発現させた後、精製した。ERM蛋白質と試験管内において混合したのち、グルタチオンビーズにGST融合蛋白質を吸着させ、洗浄、溶出の際、ERM蛋白質を伴うかどうかをERM蛋白質に対する抗体により検出した。この実験から、ICAM-2の細胞質領域とERM蛋白質との、試験管内での結合が確認された。また、同じ領域を膜蛋白質である、E型カドヘリンの細胞質領域と入れ替えたキメラ膜蛋白質を培養細胞に発現させたところ、ERM蛋白質と同様、微絨毛に局在することがわかった。ICAM-2の細胞貿領域は28アミノ酸からなり、極めて塩基性アミノ酸に富んでいた。細胞質領域が塩基性アミノ酸に富むという特徴をもつ膜蛋白質をデータベースから検索し、そのひとつとしてエレ-2レセプターαを見い出した。IL-2レセプターαの細胞質領域は、11アミノ酸からなる。IL-2レセプターαも培養細胞での発現実験から、ERM蛋白とともに微絨毛に局在することがわかった。ERM蛋白質は、アクチン繊維と細胞膜との結合にさまざまな膜蛋白質を利用するらしい。

使用CD43和CD44，我们估计与ERM蛋白结合的膜蛋白的细胞贸易区域富含碱性氨基酸，今年我们获得了具有相同特性的ICAM-2和IL-2受体α的实验结果。 ICAM-2的细胞贸易区域是一种膜蛋白，据报道与Ezrin是Ezrin是ERM跳蚤自动源物种之一，在大肠杆菌中表示为具有GST的融合蛋白，然后纯化。与试管中的ERM蛋白混合后，将GST融合蛋白吸附在谷胱甘肽珠上，然后洗涤和洗脱时，检测到针对ERM蛋白的抗体以确定ERM蛋白是否伴有抗体。该实验证实了ICAM-2和ERM蛋白的细胞质区域之间的体外结合。此外，当嵌合膜蛋白用E型钙粘蛋白的细胞质区域（一种膜蛋白）代替同一区域时，在培养的细胞中表达了膜蛋白时，它们被发现与ERM蛋白一样局部在微绒毛中。 ICAM-2的细胞贸易区域由28个氨基酸组成，并且含有碱性氨基酸的极富含。搜索数据库寻找膜蛋白，其特征是细胞质区域富含碱性氨基酸，并且在其中一个氨基酸中发现了Electro-2受体α。 IL-2受体α的细胞质区域由11个氨基酸组成。培养细胞中的表达实验还表明，IL-2受体α与ERM蛋白一起定位于微绒毛。 ERM蛋白显然利用各种膜蛋白将肌动蛋白与细胞膜结合。

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Hirao,M.et al.: "Regulation mechanism of ERM(ezrin/radixin/moesin)protein/plasma membrane association" J.Cell Biol.135. 37-51 (1996)

Hirao,M.et al.：“ERM（ezrin/radixin/moesin）蛋白/质膜关联的调节机制”J.Cell Biol.135。

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0
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Ando-Akatsuka,Y.et al.: "Interspecies diversity of the occludin sequence:cDNA cloning of human,mouse,dog,and rat-kangaroo homologues." J.Cell Biol.133. 43-47 (1996)

Ando-Akatsuka, Y. 等人：“occludin 序列的种间多样性：人类、小鼠、狗和大鼠-袋鼠同源物的 cDNA 克隆。”

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影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Tokai ,K: "Kid,a novel kinesin-like DNA binding protein,is localized to chromosomes and the mitotic spindle." EMBO J.15. 457-467 (1996)

Tokai,K：“Kid 是一种新型驱动蛋白样 DNA 结合蛋白，定位于染色体和有丝分裂纺锤体。”

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通讯作者：
米村重信