細胞骨格と膜蛋白質とのERM蛋白質を介した相互作用の解析

通过 ERM 蛋白分析细胞骨架和膜蛋白之间的相互作用

• 批准号: 08770085
• 负责人: 米村 重信
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770085/
• 关键词: ERM; アクチン繊維; 微絨毛; CD43; CD44; ICAM-2

ERM蛋白質が結合する膜蛋白質の細胞貿領域の特徴が塩基性アミノ酸に富むことであるとを、CD43,CD44を用いて推定してきたが、本年は、同じ特徴をもつICAM-2,IL-2レセプターαからもそれを支持する実験結果を得た。ERM蚤自質の一つであるエズリンと分布が一致するという報告のある膜蛋白質、ICAM-2の細胞貿領域をGSTとの融合蛋白質として大腸菌において、発現させた後、精製した。ERM蛋白質と試験管内において混合したのち、グルタチオンビーズにGST融合蛋白質を吸着させ、洗浄、溶出の際、ERM蛋白質を伴うかどうかをERM蛋白質に対する抗体により検出した。この実験から、ICAM-2の細胞質領域とERM蛋白質との、試験管内での結合が確認された。また、同じ領域を膜蛋白質である、E型カドヘリンの細胞質領域と入れ替えたキメラ膜蛋白質を培養細胞に発現させたところ、ERM蛋白質と同様、微絨毛に局在することがわかった。ICAM-2の細胞貿領域は28アミノ酸からなり、極めて塩基性アミノ酸に富んでいた。細胞質領域が塩基性アミノ酸に富むという特徴をもつ膜蛋白質をデータベースから検索し、そのひとつとしてエレ-2レセプターαを見い出した。IL-2レセプターαの細胞質領域は、11アミノ酸からなる。IL-2レセプターαも培養細胞での発現実験から、ERM蛋白とともに微絨毛に局在することがわかった。ERM蛋白質は、アクチン繊維と細胞膜との結合にさまざまな膜蛋白質を利用するらしい。

ERM protein binding to membrane proteins and cell trade domain characteristics are basic, acidic, rich, CD43, CD44, putative, current, and homogeneous characteristics, ICAM-2,IL-2, and IL-2. ERM is a fusion protein of membrane protein, ICAM-2 and cell trade domain. It is produced and purified in Escherichia coli. ERM protein is mixed in the test tube, and GST fusion protein is adsorbed, washed, and dissolved. ERM protein is mixed in the test tube, and antibody is detected. The binding of ICAM-2 to ERM proteins in the cytoplasmic domain and in the assay tube was confirmed. E-type membrane proteins are produced in cultured cells, and ERM proteins are produced in cultured cells. ICAM-2 cell trade domain is 28 years old, extremely rich in basic acids. Cytoplasmic domain: basic, acidic, rich, characteristic, membrane protein, protein, etc. IL-2 is the most potent form of IL-2 in the cytoplasm. IL-2 protein and microvilli in cultured cells ERM protein is used in cell membrane binding and membrane protein utilization.

项目成果

Hirao,M.et al.: "Regulation mechanism of ERM(ezrin/radixin/moesin)protein/plasma membrane association" J.Cell Biol.135. 37-51 (1996)

Hirao,M.et al.：“ERM（ezrin/radixin/moesin）蛋白/质膜关联的调节机制”J.Cell Biol.135。

Ando-Akatsuka,Y.et al.: "Interspecies diversity of the occludin sequence:cDNA cloning of human,mouse,dog,and rat-kangaroo homologues." J.Cell Biol.133. 43-47 (1996)

Ando-Akatsuka, Y. 等人：“occludin 序列的种间多样性：人类、小鼠、狗和大鼠-袋鼠同源物的 cDNA 克隆。”

Tokai ,K: "Kid,a novel kinesin-like DNA binding protein,is localized to chromosomes and the mitotic spindle." EMBO J.15. 457-467 (1996)

Tokai,K：“Kid 是一种新型驱动蛋白样 DNA 结合蛋白，定位于染色体和有丝分裂纺锤体。”