細胞質分裂におけるアクチン繊維と膜蛋白質(CD43とCD44)との相互作用の解析

胞质分裂过程中肌动蛋白纤维与膜蛋白（CD43和CD44）相互作用的分析

• 批准号: 07780637
• 负责人: 米村 重信
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780637/
• 关键词: 分裂溝; ERM; CD43; CD44; アクチン繊維

1、分裂溝においてアクチン繊維が細胞膜を引っぱるための構造的基盤にERM蛋白質が含まれるのではないかと考え、ERM蛋白質と分裂溝に濃縮するタイプの膜蛋白質とが実際に結合するのかを検証することにした。2、ERM蛋白質は、バキュロウイルス/昆虫細胞の発現系から精製したものを使用した。膜蛋白質としては、CD43とCD44とを選び、GST融合蛋白質のかたちで、その細胞質領域を大腸菌に発現させ、グルタチオンビーズ上に精製した。ビーズ上の融合蛋白質とERM蛋白質を混合し、洗浄後も結合しているERM蛋白質を抗体により検出した。細胞における局在を見るためには、E型カドヘリンの細胞外領域をダクとCD43:CD44の細胞質領域の全長や欠損変異蛋白質をつなげた融合蛋白質を哺乳類培養細胞に発現させた。3、CD43とCD44の細胞質領域とERM蛋白質とは、in vitroにおいて直接結合した。この結果は、それぞれの膜蛋白質の細胞における分布がERM蛋白質と一致することを分子レベルで示すものであり、ERM蛋白質がアクチン繊維と細胞膜との結合の場に含まれることを支持する。膜蛋白質における、ERMとの結合に必要な領域を細胞膜直下の約30アミノ酸(CD43)、訳20アミノ酸(CD44)にまで絞り込むことができた。細胞の中でERMとCD43、CD44との分布が一致することに、これらの結合領域が実際に必要かどうかを確かめるために、CD43、CD44の細胞質領域の欠損変異膜蛋白質をマウスL細胞に発現させたところ、結合領域を持つ膜蛋白質はERMと局在が等しく、結合領域を持たない膜蛋白質は局在の正確な一致は見られなかった。これらの2つの結合領域のアミノ酸配列間共通点である、正の荷電が結合に必要なのかもしれない。

1. The cleavage groove contains ERM protein and the cleavage groove concentrates ERM protein in the cell membrane. 2. ERM protein is refined and used in insect cell development. Membrane proteins, CD43, CD44, GST fusion proteins, and cytoplasmic proteins are produced in E. coli and purified. The fusion protein and ERM protein are mixed, washed and combined. The expression of CD43: CD44 fusion protein in mammalian cells in culture was studied. 3, CD43, CD44 and ERM protein binding directly in vitro The results showed that ERM protein was distributed uniformly in the cell, and ERM protein was distributed uniformly in the cell membrane. Membrane protein binding, ERM binding, essential domain of cell membrane directly under about 30 minutes of acid (CD43), 20 minutes of acid (CD44), and so on. The distribution of ERM CD43 and CD44 in cells is consistent with that of ERM CD43 and CD44. The binding domain of ERM CD43 and CD44 in cells is consistent with that of ERM CD44 and CD44. The common point between the two binding domains is that the positive charge is necessary for binding.

项目成果

Sagara, J.: "Cellular actin-binding ezrin-radixin-moesin (ERM) family proteins are incorporated into the rabies virion and closely associated with viral envelope proteins in the cell." Virology. 206. 485-494 (1995)

Sagara, J.：“细胞肌动蛋白结合埃兹蛋白-根蛋白-模蛋白 (ERM) 家族蛋白被整合到狂犬病病毒粒子中，并与细胞中的病毒包膜蛋白密切相关。”

Takeda, H.: "V-src kinase shifts the cadherin-based cell adhesion from the strong to the weak state and β catenin is not reguired for the shift." J. Cell Biol.131. 1839-1847 (1995)

Takeda, H.：“V-src 激酶将基于钙粘蛋白的细胞粘附从强状态转变为弱状态，而这种转变不需要 β 连环蛋白。”J. Cell Biol.131（1995）。