酵母のカルネキシン及びPDIホモログノックアウトが蛋白質の品質管理に及ぼす影響

酵母钙联蛋白和 PDI 同源物敲除对蛋白质质量控​​制的影响

• 批准号: 15032236
• 负责人: 加藤 昭夫
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15032236/
• 关键词: カルネキシン; PDI; シャペロン; タンパク質品質管理; 酵母S. cerevisiae

酵母Saccharomyces cerevisiaeの膜結合型分子シャペロンであるカルネキシン、PDIホモログ(Eps1)が新生蛋白質の品質管理に関与することを証明するために、これらの分子シャペロンをノックアウトした酵母を作成し、リゾチームやシスタチンなどの不安定変異体をモデル蛋白質として、発現分泌させた。酵母のカルネキシンをノックアウトすることによって、アミロイド型変異リゾチームや不安定変異リゾチームが多量分泌することを明らかにし、この観察により、カルネキシンがタンパク質の品質管理に関与していることを明確に示した。また、酵母のカルネキシンのクローニングに成功し、その機能を詳細に調べた。その結果、カルネキシンはモデル蛋白質のリフォールドを促進するいわゆるシャペロン活性を示すが、モノグルコース型のハイマンノース糖鎖の存在下ではその機能は失われた。この観察は(1)カルネキシンのレクチンドメインが新生タンパク質との相互作用に必須であること。(2)新生タンパク質のフォールディングはレクチンドメインに近接した領域で行われることを示すものである。さらに、カルネキシンと同様に膜接合型分子シャペロンであるPDIホモログ(Eps1)をノックアウトした酵母を作成することに成功したので、この酵母を用いて、Eps1がSS結合を多く含む蛋白質(リゾチーム、シスタチン)の品質管理にどのような影響を及ぼすか検討したところ、Eps1ノックアウト酵母ではこれらのタンパク質が野生型酵母に比べ著しく分泌すること、また活性の低下したものが分泌していることが明らかになり、Eps1がSS結合を含むタンパク質の品質管理に関与していることが示された。

The membrane-bound molecules of yeast Saccharomyces cerevisiae are produced and secreted by yeast, PDI and Eps1, which are related to the quality control of nascent proteins. The yeast production system is characterized by a variety of factors, such as the type of bacteria, and the type of bacteria. The function of the system is adjusted in detail. As a result of this, the protein activity of the protein is promoted, and the protein activity of the protein is lost in the presence of the sugar chain. This observation (1) is necessary for the interaction between the new generation and the new generation. (2)The new generation of high-quality products, such as: In addition, Kallikin and the same membrane-binding molecular molecule, PDI oligosaccharides (Eps1), were successfully made using yeast. However, when this yeast is used, Eps1 binds to SS and contains more protein. The quality control of the yeast (Eps1, Eps2, Eps3, Eps4, Eps5, Eps6, Eps7, Eps8, Eps9, Eps9, Eps9

项目成果

A.Saito, Y.Sako, M.Usui, H.Azakami, A.Kato: "Functional properties of glycosylated lysozyme secreted in Pichia Pastoris."Biosci.Biotech.Biochem.. 67. 2334-2343 (2003)

A.Saito、Y.Sako、M.Usui、H.Azakami、A.Kato：“毕赤酵母中分泌的糖基化溶菌酶的功能特性。”Biosci.Biotech.Biochem.. 67. 2334-2343 (2003)

S.T.Liu, A.Saito, H.Azakami, A.Kato: "Expression purification, and characterization of an unstable lysozyme mutant in Pichia pastoris."Protein Expression and Purification. 27. 304-312 (2003)

S.T.Liu、A.Saito、H.Azakami、A.Kato：“毕赤酵母中不稳定溶菌酶突变体的表达纯化和表征。”蛋白质表达和纯化。

加藤昭夫, 川岸明彦, 河田康志, 内海 成, 吉川正明, 山縣ゆり子: "タンパク質工学-生命科学系分野のための-"医学出版. 305 (2004)

Akio Kato、Akihiko Kawagishi、Yasushi Kawata、Sei Utsumi、Masaaki Yoshikawa、Yuriko Yamagata：“蛋白质工程 - 用于生命科学领域 -”医学出版 305（2004）。

S.Begum, A.Saito, A.Kato, J.He, H.Azakami: "Expression and characterization of chicken ovoinhibitor in Pichia pastoris"Nahrung. 47. 359-363 (2003)

S.Begum、A.Saito、A.Kato、J.He、H.Azakami：“毕赤酵母中鸡卵抑制剂的表达和表征”Nahung。