酵母のカルネキシン及びPDIホモログノックアウトが蛋白質の品質管理に及ぼす影響

酵母钙联蛋白和 PDI 同源物敲除对蛋白质质量控制的影响

基本信息

批准号：
15032236
负责人：
加藤昭夫
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15032236/
关键词：
カルネキシン PDI シャペロンタンパク質品質管理酵母S. cerevisiae

项目摘要

酵母Saccharomyces cerevisiaeの膜結合型分子シャペロンであるカルネキシン、PDIホモログ(Eps1)が新生蛋白質の品質管理に関与することを証明するために、これらの分子シャペロンをノックアウトした酵母を作成し、リゾチームやシスタチンなどの不安定変異体をモデル蛋白質として、発現分泌させた。酵母のカルネキシンをノックアウトすることによって、アミロイド型変異リゾチームや不安定変異リゾチームが多量分泌することを明らかにし、この観察により、カルネキシンがタンパク質の品質管理に関与していることを明確に示した。また、酵母のカルネキシンのクローニングに成功し、その機能を詳細に調べた。その結果、カルネキシンはモデル蛋白質のリフォールドを促進するいわゆるシャペロン活性を示すが、モノグルコース型のハイマンノース糖鎖の存在下ではその機能は失われた。この観察は(1)カルネキシンのレクチンドメインが新生タンパク質との相互作用に必須であること。(2)新生タンパク質のフォールディングはレクチンドメインに近接した領域で行われることを示すものである。さらに、カルネキシンと同様に膜接合型分子シャペロンであるPDIホモログ(Eps1)をノックアウトした酵母を作成することに成功したので、この酵母を用いて、Eps1がSS結合を多く含む蛋白質(リゾチーム、シスタチン)の品質管理にどのような影響を及ぼすか検討したところ、Eps1ノックアウト酵母ではこれらのタンパク質が野生型酵母に比べ著しく分泌すること、また活性の低下したものが分泌していることが明らかになり、Eps1がSS結合を含むタンパク質の品質管理に関与していることが示された。

To prove that calnexin, a membrane-bound molecular chaperone of the yeast Saccharomyces cerevisiae and PDI homolog (Eps1), are involved in the quality control of nascent proteins, yeast knocked out of these molecular chaperones, was created, and unstable mutants such as lysozyme and cystatin were expressed and secreted as model proteins.淘汰酵母钙蛋白酶表明淀粉样蛋白型和不稳定的突变溶菌酶的分泌很高，这种观察结果清楚地表明钙结合蛋白参与蛋白质质量控制。此外，酵母钙粘蛋白已成功克隆，并详细研究了其功能。结果，钙钙蛋白表现出所谓的伴侣活性，可促进模型蛋白的重新散发，但在存在一戈糖糖型高甘露糖糖链的情况下，其功能却丧失。该观察结果是（1）钙钙蛋白的凝集素结构域对于与新生蛋白的相互作用至关重要。（2）这表明新生蛋白的折叠发生在接近凝集素结构域的区域中。此外，我们已经成功地创造了一种酵母，该酵母将PDI同源物（EPS1）淘汰，一种与钙粘蛋白相似的膜偶联的分子伴侣，当我们研究EPS1如何影响蛋白质的质量控制时，该蛋白质的质量控制，这些蛋白质含有许多SS结合的蛋白质（使用lysozyme neeptions，它揭示了这些YEATS，它都会揭示这些YEATS，以下这些蛋白质，以至于这些蛋白质，该蛋白质均揭示了这些蛋白质，以至于这些蛋白与野生型酵母相比，酵母菌的活性降低，表明EPS1参与了含有SS结合的蛋白质的质量控制。