酵母における小胞体カルネキシンノックアウトが新生糖蛋白の品質管理機能に及ぼす影響

酵母内质网钙连接蛋白敲除对新生糖蛋白质量控制功能的影响

• 批准号: 11153218
• 负责人: 加藤 昭夫
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11153218/
• 关键词: 分子シャペロン; カルネキシン; 蛋白質の品質管理; リゾチーム変異体; グリコシル化リゾチーム

酵母S.cerevisiaeの小胞体シャペロンカルネキシンの品質管理機構を明らかにするために、カルネキシンをノックアウトした酵母とノックアウトしていない野生型酵母を用いて、糖蛋白質の発現、分泌を比較した。モデル糖蛋白質として、構造安定性の異なる種々の変異リゾチームをグリコシル化するように分子設計したものを用いた。リゾチームでアミロイドシスを引き起こすことが知られている変異体Asp66His,Ile55Thrは正常な酵母ではほとんど分泌しないが、カルネキシン欠損株では多量に分泌すること、また、ジスルフィド欠損変異体C76A、へリックス不安定変異体K13Dも同様に、カルネキシン欠損株で多量に発現分泌することを明らかにした。この観察はカルネキシンの品質管理機能の存在を直接証明したものである。本研究では、さらに、カルネキシンの品質管理機構をより詳細に解明するために、不安定変異リゾチームを分泌させる系において、カルネキシン欠損による他の分子シャペロン、UPR(unfolded protein response)の挙動を調べた。この結果、カルネキシン欠損株で不安定変異体を発現、分泌させると、BipやPDIのような小胞体分子シャペロンが著しく増加した。このことはカルネキシンで行っていた品質管理が機能しなくなり、UPRが生じたことに起因し、カルネキシンの品質管理がさらに証明された。今後、このカルネキシンの品質管理がプロテアソーム分解系で起こるのかを明らかにすることが残された課題である。

The quality control mechanism of yeast S. cerevisia cell culture system is clearly defined, and the production and secretion of glycoprotein in wild type yeast are compared. The molecular design of glycoproteins and their structural stability The normal yeasts secreted a large amount of Asp 66His,Ile 55Thr, which was found in the mutant K13D. The normal yeasts secreted a large amount of Asp 66His,Ile 55Thr, which was found in the mutant K76A, which was found in the mutant K13D. The existence of quality management functions in the inspection process is directly proved. This study is aimed at explaining in detail the mechanism of quality control of the production system and the regulation of UPR(unfolded protein response). As a result of this, the production of protein and protein is not stable, and the secretion of protein and protein is increasing. The quality management of the product is the function of the product, the cause of the product, and the quality management of the product. In the future, the quality management of the production system will be divided into three parts: