酵母のカルネキシン及びPDIホモログノックアウトが蛋白質の品質管理に及ぼす影響

酵母钙联蛋白和 PDI 同源物敲除对蛋白质质量控制的影响

基本信息

批准号：
14037244
负责人：
加藤昭夫
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

酵母Saccharomyces cerevisiaeの糖タンパク質特異的な分子シャペロンカルネキシンをノックアウトすることによって、アミロイド型変異リゾチームや不安定変異リゾチームが多量分泌することを明らかにした。この観察はカルネキシンがタンパク質の品質管理に関与していることを示しており、分子病(アンフォールディング病)と分子シャペロンの機能との関連を明確に示すものである。今年度は酵母Saccharomyces cerevisiaeのカルネキシンのクローニングに成功し、その機能を詳細に調べた。その結果、カルネキシンはクエン酸シンターゼのリフォールドを促進するいわゆるシャペロン活性を示すが、モノグルコース型のハイマンノース糖鎖の存在下ではその機能は失われた。この観察は(1)カルネキシンのレクチンドメインが新生タンパク質との相互作用に必須であること。(2)新生タンパク質のフォールディングはレクチンドメインに近接した領域で行われる事を示す。今年度はさらに、カルネキシンと同様に膜接合型分子シャペロンであるPDIホモログ(Eps1)をノックアウトした酵母を作成することに成功したので、この酵母を用いて、Eps1がSS結合を多く含む蛋白質(リゾチーム、シスタチン)の品質管理にどのような影響を及ぼすか検討中である。

我们已经揭示了淀粉样蛋白型突变体溶菌酶和不稳定的突变溶菌酶的高分分泌是通过敲除酵母糖含量的酿酒酵母的糖蛋白特异性分子伴侣钙蛋白钙蛋白酶蛋白的分泌。该观察结果表明，钙钙蛋白参与蛋白质质量控制中，清楚地表明了分子疾病（展开疾病）与分子伴侣的功能之间的关联。今年，我们从酿酒酵母成功克隆了钙粘蛋白，并详细研究了其功能。结果，钙钙蛋白表现出所谓的伴侣活性，可促进柠檬酸酸酯合酶的重新折叠，但在单戈糖型浓糖链的存在下，其功能却丧失。该观察结果是（1）钙钙蛋白的凝集素结构域对于与新生蛋白的相互作用至关重要。（2）表明新生蛋白的折叠发生在接近凝集素结构域的区域中。今年，我们还成功地创建了一种酵母，该酵母击倒了PDI同源物（EPS1），这是一种膜偶联的分子伴侣，类似于钙粘蛋白，因此我们目前正在使用该酵母来研究EPS1如何影响蛋白质的质量控制，该蛋白质包含许多SS结合（溶菌酶，cystatin）。