プロテアソームS5aサブユニットによるポリユビキチン鎖認識の立体構造学的研究

蛋白酶体S5a亚基识别多聚泛素链的三维结构研究

• 批准号: 15032248
• 负责人: 杤尾 豪人
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15032248/
• 关键词: 蛋白質分解; ユビキチン; プロテアソーム; NMR; ユビキチン結合モチーフ

プロテアソームにより認識・分解されるためのシグナルとなるポリユビキチン鎖はユビキチンのLys48とCOOH末端によるイソペプチド結合を介してポリ化する。これとは別に、機能は不明瞭であるがLys63を介するポリユビキチン化も知られている。我々は、ユビキチン化酵素群(E1、E2)を使ったin vitro酵素反応により、Lys48リンク及びLys63リンクのジユビキチン及びテトラユビキチンを調製し、NMR、ESR、X線小角散乱法によってその立体構造を解析し、これらポリ化様式の違いによる立体構造の差異を明らかにした。これらの結果をまとめて論文を発表した。ユビキチンは様々准分子と相互作用、複合体形成を行なうことにより、多用な生物学的機能を発揮することが知られているが、その分子認識の鍵となるのは、種々のユビキチン結合モチーフである。これらは、現在までに数種類が知られているが、我々はそのうちの一つ、UBA (ubiquitin associated)ドメインとユビキチンの複合体の立体構造を溶液NMR法によって決定し、分子認識機構を原子分解能で解明した。これはユビキチン-UBA複合体の最初の構造決定である。この結果については、Structure誌に発表した。また、2003年にユビキチン結合モチーフであると示唆されたVHSドメインについてもユビキチンとの結合様式を原子分解能で調べるべく研究を開始した。STAM2蛋白質のVHSドメインの試料調製を行ない、NMRを使ってユビキチンとの相互作用実験を行なった。データの解析の結果、VHSの中の、どのアミノ酸残基がユビキチンと結合するかを明らかにした。

The solution is to identify and analyze the solution to the Lys48 and COOH terminal of the solution. The function is unknown. Lys63 is the key to the success of the project. The three dimensional structure of the enzyme group (E1, E2) is analyzed by NMR, ESR, X-ray small angle scattering method, and the difference in the three dimensional structure of the enzyme group (E1, E2) is clearly shown. The results of this study are now announced in the paper. The interaction of excimer and complex formation is the key to understanding the molecular structure of the complex. The three-dimensional structure of UBA (ubiquitin associated) complexes is determined by solution NMR, and molecular recognition mechanisms and atomic decomposition energy are clarified. The initial structural decision of the complex is made. The result of this is that the Structure of the structure is displayed. In 2003, the study of atomic decomposition energy modulation began. STAM2 protein VHS test sample modulation, NMR test sample interaction The results of the analysis of VHS, VHS

项目成果

Auesukaree C, Homma T, Tochio H, Shirakawa M, Kaneko Y, Harashima S.: "Intracellular phosphate serves as a signal for the regulation of the PHO pathway in Saccharomyces cerevisiae."Journal of Biological Chemistry. 279,17. 17289-17294 (2004)

Auesukaree C、Homma T、Tochio H、Shirakawa M、Kaneko Y、Harashima S.：“细胞内磷酸盐在酿酒酵母中充当调节 PHO 途径的信号。”生物化学杂志。

High-throughput construction method of expression vector of peptides for NMR study suited for isotopic labeling.

适用于同位素标记的核磁共振研究肽表达载体的高通量构建方法。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Protein Eng Des Sel 17
• 作者: Tenno;T.;Goda;N.;Tateishi;Y.;Tochio;H.;Mishima;M.;Hayashi;H.;Shirakawa;M.;Hiroaki;H.
• 通讯作者: H.

Intracellular phosphate serves as a signal for the regulation of the PHO pathway in Saccharomyces cerevisiae

• DOI: 10.1074/jbc.m312202200
• 发表时间: 2004-04-23
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Auesukaree, C;Homma, T;Harashima, S
• 通讯作者: Harashima, S

Structural basis for distinct roles of Lys63- and Lys48-linked polyubiquitin chains

• DOI: 10.1111/j.1365-2443.2004.00780.x
• 发表时间: 2004-10-01
• 期刊: GENES TO CELLS
• 影响因子: 2.1
• 作者: Tenno, T;Fujiwara, K;Shirakawa, M
• 通讯作者: Shirakawa, M

Structure of the ubiquitin-interacting motif of S5a bound to the ubiquitin-like domain of HR23B

• DOI: 10.1074/jbc.m309448200
• 发表时间: 2004-02-06
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Fujiwara, K;Tenno, T;Shirakawa, M
• 通讯作者: Shirakawa, M