TRU型肺腺癌の起源細胞候補であるTTF-1/p63共陽性細胞の性質の解明

阐明 TTF-1/p63 共阳性细胞的特性，这些细胞是 TRU 型肺腺癌的候选细胞来源

• 批准号: 16K21648
• 负责人: 山田 健二
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: National Cancer Center Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-01 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16K21648/
• 关键词: TRU-type肺腺癌; TTF-1; p63; LGR6; Wntシグナル; R-Spondin; 発がん実験; 組織幹細胞; 肺癌; TRU; 初代培養; 培養法; 発がんモデル; 癌幹細胞; 発がんメカニズム; 三次元培養

喫煙と関係なく発生するTRU(terminal respiratory unit) typeの肺腺癌の起源細胞候補となる新規の正常対応細胞として、TTF-1/p63共陽性細胞(DP細胞)をヒト成体肺の細気管支肺胞管移行部に見出し、その細胞の長期培養(telomerase活性の維持)とTTF-1発現の維持にWnt3A/R-Spondin1のconditioned medium(WR)の添加が重要であることを明らかにした。DP細胞にhTERTを導入し不死化させた細胞をシングルセルクローニング後、サブクローニングした結果、DP細胞からなるクローンの他に、細胞形態や増殖能が異なるTTF-1陽性p63陰性のII型肺胞上皮様の細胞(TTF-1-SP細胞)からなるクローンを生じることがわかり、DP細胞は自己複製の他に少なくとも1分化能があるものと考えられた。R-Spondinの受容体であるLGR5やLGR6はWntシグナルを増強し、種々の臓器の上皮幹細胞で発現しているため、これらの発現についてqPCRで調べたところ、TTF-1-SP細胞にLGR6が高発現しており、WR添加によりAXIN1やLGR6自体など、Wnt標的遺伝子の発現が亢進していることが確認された。一方DP細胞ではLGR6発現レベルはTTF-1-SP細胞の1/200以下と極めて低かったが、WR添加によりbasal levelの30倍程度まで発現が亢進したことから、DP細胞からTTF-1-SP細胞への分化に関与している可能性も考えられた。LGR5の発現は両者の細胞で極めて低かった。これらの細胞にTRU typeの肺腺癌に見られるEML4-ALKをはじめとする癌遺伝子を導入する発がん実験のためのウイルスベクターを作製したが、所属研究施設の規定変更により研究課題が廃止となり、実験動物への細胞移植実験は行うことはできなかった。

作为一种新的正常对应细胞，是一个候选细胞，该细胞来自TRU（末端呼吸单元）型肺腺癌型，它独立于吸烟而发生，TTF-1/p63共阳性细胞（DP细胞）在支气管肺泡的肺泡过渡中发现了人类成年肺的添加，并揭示了有条件的培养物（WR）。 （维持端粒酶活性）并保持TTF-1表达。 The cells that were immortalized by introducing hTERT into DP cells were single-cell cloning and then subcloning, and in addition to clones made up of DP cells, it was found that in addition to clones made up of DP cells, clones made up of TTF-1-positive p63-negative type II alveolar epithelial-like cells (TTF-1-SP cells) with different cell morphology and proliferation capabilities, and it was认为除自我更新外，DP细胞除了至少具有一种分化能力。由于LGR5和LGR6是R-Spondin的受体，因此增强了Wnt信号并在各种器官的上皮干细胞中表达，因此通过qPCR检查了这些表达式，并且可以证实LGR6在TTF-1-SP-SP细胞中高度表达，并且添加了WR的添加WRS的wnt靶基因表达，例如Axin1和LGR6本身。另一方面，DP细胞中的LGR6表达水平极低，比TTF-1-SP细胞的LGR6表达水平非常低，但是添加WR的表达将表达提高到基础水平的30倍，这也可以被认为与从DP细胞与TTF-1-SP细胞的分化有关。 LGR5表达在两个细胞中都极低。我们为这些细胞中的癌变创建了病毒载体，包括在TRU型肺腺癌中发现的EML4-ALK来进行致癌，但是由于研究设施的法规变化，研究主题的变化已被废除，并且无法将细胞移植到实验动物中。