TRU型肺腺癌の起源細胞候補であるTTF-1/p63共陽性細胞の性質の解明

阐明 TTF-1/p63 共阳性细胞的特性，这些细胞是 TRU 型肺腺癌的候选细胞来源

• 批准号: 16K21648
• 负责人: 山田 健二
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: National Cancer Center Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-01 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16K21648/
• 关键词: TRU-type肺腺癌; TTF-1; p63; LGR6; Wntシグナル; R-Spondin; 発がん実験; 組織幹細胞; 肺癌; TRU; 初代培養; 培養法; 発がんモデル; 癌幹細胞; 発がんメカニズム; 三次元培養

喫煙と関係なく発生するTRU(terminal respiratory unit) typeの肺腺癌の起源細胞候補となる新規の正常対応細胞として、TTF-1/p63共陽性細胞(DP細胞)をヒト成体肺の細気管支肺胞管移行部に見出し、その細胞の長期培養(telomerase活性の維持)とTTF-1発現の維持にWnt3A/R-Spondin1のconditioned medium(WR)の添加が重要であることを明らかにした。DP細胞にhTERTを導入し不死化させた細胞をシングルセルクローニング後、サブクローニングした結果、DP細胞からなるクローンの他に、細胞形態や増殖能が異なるTTF-1陽性p63陰性のII型肺胞上皮様の細胞(TTF-1-SP細胞)からなるクローンを生じることがわかり、DP細胞は自己複製の他に少なくとも1分化能があるものと考えられた。R-Spondinの受容体であるLGR5やLGR6はWntシグナルを増強し、種々の臓器の上皮幹細胞で発現しているため、これらの発現についてqPCRで調べたところ、TTF-1-SP細胞にLGR6が高発現しており、WR添加によりAXIN1やLGR6自体など、Wnt標的遺伝子の発現が亢進していることが確認された。一方DP細胞ではLGR6発現レベルはTTF-1-SP細胞の1/200以下と極めて低かったが、WR添加によりbasal levelの30倍程度まで発現が亢進したことから、DP細胞からTTF-1-SP細胞への分化に関与している可能性も考えられた。LGR5の発現は両者の細胞で極めて低かった。これらの細胞にTRU typeの肺腺癌に見られるEML4-ALKをはじめとする癌遺伝子を導入する発がん実験のためのウイルスベクターを作製したが、所属研究施設の規定変更により研究課題が廃止となり、実験動物への細胞移植実験は行うことはできなかった。

The relationship between smoking and smoking is TRU (terminal respiratory unit) Candidate cell of origin for type lung adenocarcinoma, new regulation, normal cells, TTF-1/p63 co-positive cells (DP cells), adult lung, cell duct branch, pneumocyte duct transition part Long-term culture of cells (maintenance of telomerase activity) and maintenance of TTF-1 expression and Wnt3A/R-Spondin1 conditioned The addition of medium(WR) is very important. After the DP cells were introduced into hTERT, the immortal cells were transformed into sterilized cells.ーニングした results, DP cell からなるクローのTAに, cell morphology やproliferation energy がisoなるTTF-1 Positive p63 negative type II pneumocyte epithelial cells (TTF-1-SP cells) からなるクローンを生じることがわかり, DP cells can copy themselves and differentiate themselves. R-Spondin's receptor is LGR5 and LGR6 and Wnt is strong, The epithelial stem cells of the plant are now in use and the qPCR is in tuneところ、TTF-1-SP cellsにLGR6が高発成しており、WR addedによりAXI N1やLGR6 autologous and Wnt target genes have been confirmed and confirmed. One side of the DP cell is LGR6, the TTF-1-SP cell is 1/200 or less, the pole is low, the WR is added, the basal The level of 30 times is high, and the DP cells and TTF-1-SP cells are differentiated and the possibility is tested. The appearance of LGR5 means that the cells in which it appears are extremely low and low.これらのcellにTRU typeのLung adenocarcinomaに见られるEML4-ALKをはじめとする Cancer Legacy 伝子を Import する発がん実験のためのウイルスベクターをProduced by the manufacturer, the regulations of the affiliated research facility have changed, the research topic has been changed, and the animal cell transplantation has been carried out.