TRU型肺腺癌の起源細胞候補であるTTF-1/p63共陽性細胞の性質の解明

阐明 TTF-1/p63 共阳性细胞的特性，这些细胞是 TRU 型肺腺癌的候选细胞来源

• 批准号: 16K21648
• 负责人: 山田 健二
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: National Cancer Center Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-01 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16K21648/
• 关键词: TRU-type肺腺癌; TTF-1; p63; LGR6; Wntシグナル; R-Spondin; 発がん実験; 組織幹細胞; 肺癌; TRU; 初代培養; 培養法; 発がんモデル; 癌幹細胞; 発がんメカニズム; 三次元培養

喫煙と関係なく発生するTRU(terminal respiratory unit) typeの肺腺癌の起源細胞候補となる新規の正常対応細胞として、TTF-1/p63共陽性細胞(DP細胞)をヒト成体肺の細気管支肺胞管移行部に見出し、その細胞の長期培養(telomerase活性の維持)とTTF-1発現の維持にWnt3A/R-Spondin1のconditioned medium(WR)の添加が重要であることを明らかにした。DP細胞にhTERTを導入し不死化させた細胞をシングルセルクローニング後、サブクローニングした結果、DP細胞からなるクローンの他に、細胞形態や増殖能が異なるTTF-1陽性p63陰性のII型肺胞上皮様の細胞(TTF-1-SP細胞)からなるクローンを生じることがわかり、DP細胞は自己複製の他に少なくとも1分化能があるものと考えられた。R-Spondinの受容体であるLGR5やLGR6はWntシグナルを増強し、種々の臓器の上皮幹細胞で発現しているため、これらの発現についてqPCRで調べたところ、TTF-1-SP細胞にLGR6が高発現しており、WR添加によりAXIN1やLGR6自体など、Wnt標的遺伝子の発現が亢進していることが確認された。一方DP細胞ではLGR6発現レベルはTTF-1-SP細胞の1/200以下と極めて低かったが、WR添加によりbasal levelの30倍程度まで発現が亢進したことから、DP細胞からTTF-1-SP細胞への分化に関与している可能性も考えられた。LGR5の発現は両者の細胞で極めて低かった。これらの細胞にTRU typeの肺腺癌に見られるEML4-ALKをはじめとする癌遺伝子を導入する発がん実験のためのウイルスベクターを作製したが、所属研究施設の規定変更により研究課題が廃止となり、実験動物への細胞移植実験は行うことはできなかった。

The development of TRU(terminal respiratory unit) type of lung adenocarcinoma is a candidate for the development of new normal control cells and TTF-1/p63 co-positive cells (DP cells) in the transition zone of pulmonary tubules in adult lungs. The addition of Wnt3A/R-Spondin1 conditioned medium(WR) to long-term culture of TRU cells (maintenance of telomerase activity) and TTF-1 development is important. DP cells are not transformed into cells after hTERT is introduced, and DP cells are transformed into other cells. Cell morphology and proliferation ability are different. TTF-1 positive p63 negative type II lung epithelial cells (TTF-1-SP cells) are transformed into cells that replicate by themselves. R-Spondin receptor LGR5 and LGR6 are enhanced, Wnt receptor epithelial stem cells are developed, qPCR is modulated, TTF-1-SP cells are highly developed, WR is added, AXIN1 and LGR6 are enhanced, and Wnt target cells are developed. The expression of LGR6 in DP cells was lower than 1/200 of TTF-1-SP cells, and the expression of WR was increased by 30 times of basal level. The differentiation of DP cells was related to the possibility of TTF-1-SP cells. LGR5 is a cell of a person who has developed a disease. The cell type of lung adenocarcinoma was detected by EML4-ALK, and the cancer gene was introduced into the cell.