DNA Replikation via oriP des Epstein-Barr Virus

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Die latente Infektion einer Zelle ist ein Charakteristikum von Epstein-Barr Virus (EBV). In latent infizierten Zellen repliziert das virale Genom wie ein Chromosom synchron mit dem Zellzyklus. Die virale DNA Replikation erfolgt ausschließlich mit zellulären Faktoren, die Kernlokalisation des viralen Chromosoms wird dabei von einem viralen Protein (EBNA1) unterstützt. Wir haben das gesamte EBV-Genom in E. coli kloniert, was erstmals die zielgerichtete genetische Manipulation von Elementen erlaubt, die essentiell für die virale Replikation sind. Wir wollen diese neuen Möglichkeiten einsetzen, um die Replikation von EBV mit genetischen und biochemischen Methoden zu untersuchen. Zunächst werden wir das Binden des zellulären Origin Recognition Complex (ORC) an das EBV-Genom analysieren und mit EBV Mutanten bestätigen. An diesem Modellsystem wollen wir im zweiten Schritt die Komponenten des humanen präreplikativen Komplexes (preRC) identifizieren. Damit sind die Voraussetzungen geschaffen, die im dritten Schritt die genetische Definition eines chromosomalen Replikationsursprungs ermöglichen sollte.