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癌胎児性抗原(CEA)をコードする遺伝子のクローニングとその発現の機序について

癌胚抗原（CEA）基因的克隆及其表达机制

基本信息

批准号：
61015079
负责人：
渡辺武
金额：
$ 3.71万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61015079/
关键词：
CEA(癌胎児性抗原)cDNAクローニング

项目摘要

癌胎児性抗原(CEA)は初めヒト内胚葉由来消化器癌組織に共通に出現する抗原物質として同定されたが、その後消化器以外の癌や非腫瘍性疾患でもCEAの上昇がみられ更にCEA関連抗原が正常組織中にも認められ、CEA遺伝子の発現の多様性が問題となった。我々はCEA蛋白部分に対する多くのモノクローナル抗体を確立した。次にこれらの材料をもとにCEAをコードするCDNA遺伝子のクローニングを行い、クローン化されたCDNAを用いて種々の癌細胞、正常組織でのCEA遺伝子の発現状態を検索することを試みた。CEAを高度に産生しているヒト胃癌細胞株(MKN-45)よりmRNAを抽出し、in vitro translation assayとモノクローナル抗体により活性のあるmRNA分画を得た。このRNAよりcDNAを作製後、末端をEcoRIサイトとしてλg+11のベクターに組み込みcDNAライブラリーを作製した。λg+11発現ベクターによって得られたファージプラークをELISA法にてモノクローナル抗体で検索した。またCEA,NCA-2のアミノ酸配列について、CEAとNCA-2とで明らかにアミノ酸配列の異なる領域と共通の領域について14merの合成オリゴヌクレオチドを合成しプローブとして用いた。現在、CEAをコードしていると思われるいくつかのクローンを得たので解析中である。(本研究遂行中、CEAをコードするcDNAクローンの単離とその塩基配列が他のグループより報告された。(S.Oikawa,H.Nakazato,G.Kosaki,Biochem,Biophys.Res.Comm.142(2).511-518,1987)。

Carcinoma-fetal antigen (CEA) is a common antigen found in primary endodermal tissues derived from digestive cancer tissues, and is also found in post-digestive cancers and non-cancerous diseases. CEA is elevated in primary endodermal tissues, and CEA associated antigens are found in normal tissues. We have established a number of antibodies against CEA protein. The next step is to detect the presence of CEA in cancer cells and normal tissues. CEA is highly produced in gastric cancer cell line (MKN-45). mRNA is extracted and analyzed in vitro translation assay. After the RNA cDNA is prepared, the terminal EcoRI is prepared.λg+11 detection of anti-tumor antibody by ELISA CEA,NCA-2 and NCA-2 were synthesized in different domains and common domains. Now, CEA is in the middle of the analysis. (In this study, we performed a cDNA library review of CEA, and reported on the gene alignment of CEA.) (S.Oikawa,H.Nakazato,G.Kosaki,Biochem,Biophys.Res.Comm.142(2).511-518,1987)。