课题基金 / 基金详情

HIVエンハンサー結合蛋白質の解析

HIVエンハンサー結合蛋白質の解析
HIV增强子结合蛋白的分析
批准号：
01015120
负责人：
石井 俊輔
金额：
$2.24万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1989
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1989 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01015120/
关键词：
HIVエンハンサー結合蛋白質リンパ球細胞DNAアフィニティーカラムサウスウェスタン法

项目摘要

项目成果

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中文摘要
翻译
ヒトB細胞からヘパリンアガロース、DNAアフィニティカラムクロマトグラフィーによりHIVエンハンサー結合蛋白質を精製した。精製蛋白質がHIVエンハンサーに特異的に結合することはゲル移動度シフト法、DNaseIフットプリント法、UVクロスリンク法などにより確認した。さらに精製蛋白質をin vitro転写糸に加えると、HIVLTRプロモーターからの転写が促進されることも確認した。精製蛋白質は36〜42kDaの5つのポリペプチドから成り、SDSーPAGE後のrenaturation実験では、そのうち少なくとも3つのポリペプチドはHIVエンハンサーに直接結合した。一方HIVエンハンサー領域に相当するオリゴヌクレオチドを合成し、これをプローブに用いたサウスウェスタン法によりヒトB細胞cDNAライブラリーより1つのポジティブクローンを得た。このクローンはオープンリーディングフレームのみから成る1kbのインサートを含む。このインサートがコードする蛋白質領域は2つのメタルフィンガー構造を有し、大腸菌内で産生させたこの蛋白質はHIVエンハンサーに特異的に結合することがDNase Iフットプリント実験により確認された。私共はこの蛋白質をHIVーEP1(HIV enhancerーbinding protein1)と名付けた。大腸菌で産生させたHIVーEP1を抗原として作製した抗体は、ヒトB細胞から精製したHIVエンハンサー結合蛋白質とは反応せず、両者は異なる蛋白質であることが明らかとなった。以上の結果より、HIVエンハンサー結合蛋白質は複数種存在すると考えられる。
英文摘要
ヒトB細胞からヘパリンアガロース、DNAアフィニティカラムクロマトグラフィーによりHIVエンハンサー結合蛋白質を精製した。精製蛋白質がHIVエンハンサーに特異的に結合することはゲル移動度シフト法、DNaseIフットプリント法、UVクロスリンク法などにより確認した。さらに精製蛋白質をin vitro転写糸に加えると、HIVLTRプロモーターからの転写が促進されることも確認した。精製蛋白質は36〜42kDaの5つのポリペプチドから成り、SDSーPAGE後のrenaturation実験では、そのうち少なくとも3つのポリペプチドはHIVエンハンサーに直接結合した。一方HIVエンハンサー領域に相当するオリゴヌクレオチドを合成し、これをプローブに用いたサウスウェスタン法によりヒトB細胞cDNAライブラリーより1つのポジティブクローンを得た。このクローンはオープンリーディングフレームのみから成る1kbのインサートを含む。このインサートがコードする蛋白質領域は2つのメタルフィンガー構造を有し、大腸菌内で産生させたこの蛋白質はHIVエンハンサーに特異的に結合することがDNase Iフットプリント実験により確認された。私共はこの蛋白質をHIVーEP1(HIV enhancerーbinding protein1)と名付けた。大腸菌で産生させたHIVーEP1を抗原として作製した抗体は、ヒトB細胞から精製したHIVエンハンサー結合蛋白質とは反応せず、両者は異なる蛋白質であることが明らかとなった。以上の結果より、HIVエンハンサー結合蛋白質は複数種存在すると考えられる。
期刊论文(2)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Maekawa,T.et al.: "Identification and purification of the enhancerーbinding factor of human immunodeficiency virusー1." J.Biol.Chem.264. 2826-2831 (1989)
Maekawa, T. 等人：“人类免疫缺陷病毒 1 增强子结合因子的鉴定和纯化”，J.Biol.Chem.264 2826-2831 (1989)。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Maekawa,T.et al.: "Putative metal finger structure of the human immunodeficiency virus type I enhancerーbinding protein HIVーEP1." J.Biol.Chem.264. 14591-14593 (1989)
Maekawa, T. 等人：“人类免疫缺陷病毒 I 型增强子结合蛋白 HIV-EP1 的推定金属指结构。”J.Biol.Chem.264 (1989)。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
小胞体内凝集体の分解を担うオートファジーの誘導機構と分解機構の解明
  • 批准号：
    22KJ0479
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 资助金额：
    $1.09万
  • 财政年份：
    2023
  • 负责人：
    石井 俊輔
  • 依托单位：
    Chiba University
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