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HIVエンハンサー結合蛋白質の解析

HIV增强子结合蛋白的分析

基本信息

批准号：
01015120
负责人：
石井俊輔
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトB細胞からヘパリンアガロース、DNAアフィニティカラムクロマトグラフィーによりHIVエンハンサー結合蛋白質を精製した。精製蛋白質がHIVエンハンサーに特異的に結合することはゲル移動度シフト法、DNaseIフットプリント法、UVクロスリンク法などにより確認した。さらに精製蛋白質をin vitro転写糸に加えると、HIVLTRプロモーターからの転写が促進されることも確認した。精製蛋白質は36〜42kDaの5つのポリペプチドから成り、SDSーPAGE後のrenaturation実験では、そのうち少なくとも3つのポリペプチドはHIVエンハンサーに直接結合した。一方HIVエンハンサー領域に相当するオリゴヌクレオチドを合成し、これをプローブに用いたサウスウェスタン法によりヒトB細胞cDNAライブラリーより1つのポジティブクローンを得た。このクローンはオープンリーディングフレームのみから成る1kbのインサートを含む。このインサートがコードする蛋白質領域は2つのメタルフィンガー構造を有し、大腸菌内で産生させたこの蛋白質はHIVエンハンサーに特異的に結合することがDNase Iフットプリント実験により確認された。私共はこの蛋白質をHIVーEP1(HIV enhancerーbinding protein1)と名付けた。大腸菌で産生させたHIVーEP1を抗原として作製した抗体は、ヒトB細胞から精製したHIVエンハンサー結合蛋白質とは反応せず、両者は異なる蛋白質であることが明らかとなった。以上の結果より、HIVエンハンサー結合蛋白質は複数種存在すると考えられる。

The DNA of the infected cells was refined by DNA sequencing. Purified protein is identified by HIV specific binding, DNase I binding, UV binding. Today, refined protein is added to the vitro, HIVLTR is added to the vitro, HIVLTR is added to the vitro, and HIVLTR is added to the vitro. Refined protein is 36 ~ 42kDa and 5 μ mol/L, SDS PAGE and subsequent renaturation. A side of HIV domain is related to the integration of HIV and DNA. This is the first time that a file has been sent to a server. The protein domain has 2 different structures, and the protein is produced in E. coli. The protein is specifically bound to HIV. HIV EP1(HIV enhancer binding protein1) E. coli produces HIV EP1 antigen and produces antibodies, B cells, purified HIV binding proteins, and B cells produce heterogenous proteins. As a result, HIV binding proteins exist in multiple species.