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ユビキチンサイクルが支配するがん細胞の増殖と染色体不安定化

泛素循环控制的癌细胞增殖和染色体不稳定性

基本信息

批准号：
03151063
负责人：
瀬野悍二
金额：
$ 8.96万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ユビキチン活性化酵素E1の温度感受性変異株をマウスFM3A細胞から多数分離した。代表的なE1変異株を出発点にヒトおよびマウスE1cDNAをクロ-ン化し、構造決定した。両蛋白質とも1,058個のアミノ酸をコ-ドし、アミノ酸配列で両者は95%のホモロジ-を示した。各変異株を制限温度下に培養すると細胞周期上違った点で停止した。すなわち、蛋白質のユビキチン化が細胞周期に多岐にわたって関与することを示唆した。E1cDNAによる形質転換効率は変異株によって極端に異なり、概してS期停止型変異株はG2期停止型変異株に比べ形質転換され易い傾向を示した。E1変異株6株を選び、E1コ-ド領域の変異点をPCRーdirect sequencing法で決定したところ、変異点はいずれもアミノ酸置換をもたらし、また、変異点はC末端領域に集中した。しかし、S期停止型株とG2期停止型株との間で変異点領域に有意な規則性は見られなかった。CHOーK1細胞由来の温度感受性変異株tsTM13は制限温度下にM期後期における染色体の分配と脱凝縮、紡錘体の脱凝縮が起こらない。その際、正常細胞では低下するヒストンH1およびH3のリン酸化が高く維持されたまま、cdc2キナ-ゼも脱リン酸化型のまま高い活性を示した。cdc2キナ-ゼの活性に必要なサイクリンB蛋白質も分解されずに存在した。したがって、本変異株はユビキチン依存分解系の欠損をもつ可能性が示唆された。出芽酵母のG1期サイクリンがプロテア-ゼによる分解を受けない変異を多コピ-で抑圧する遺伝子HMD1を分離解析した。ホモロジ-検索の結果、G2期特異的サイクリンに見出されるユビキチンによるdestruction boxを有していた。HMD1蛋白質がG1サイクリンを分解するか解析中である。

The active enzyme E1, temperature sensitive strain, FM3A cell and most isolates were isolated. The representative of "E1" strain makes a decision by making a decision and making a decision. The representative of the "E1" strain is known as the "E1" strain. The representative of the "E1" strain is known as "E1" strain. In the protein diet of 1058, the concentration of acid and acid was 95%, and the concentration of acid was 95%. Under the limit temperature of each plant, the temperature of the cell cycle stops at the temperature limit. Protein, protein and protein. The rate of E1cDNA infection was much easier than that of S phase stop type and G2 phase stop type. Six strains of E1 were selected, E1-domain was selected, and PCR-direct sequencing method was used to determine the concentration of acid in the C-terminal domain. The G _ 2 phase stop type strains of both S and S phase stop strains have the intention to standardize the disease in the field. The origin of CHO "K1" cell, the temperature sensitivity of strain tsTM13, the distribution of chromosome in the later stage of M phase, the distribution of chromosome, the decoagulation of body, the decoagulation of body and the temperature limit of temperature. Low temperature, normal cell temperature, low temperature, high temperature, high activity, high temperature, high activity, high temperature, low temperature, high temperature, high activity, high activity, high activity. It is necessary to analyze the activity of cdc2 protein B protein in the presence of protein. In this case, there is a lack of possibility in the analysis of the dependency decomposition of this plant. Saccharomyces cerevisiae in phase G1 was isolated and analyzed by the isolation of sub-HMD1. Please check the results, please check the results of the special edition of Phase G2, and you will find that there is a bad response in the special edition of G _ 2. You will find that there is an error in destruction box. The HMD1 protein was decomposed and analyzed in the process of analysis.