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ユビキチンサイクルが支配するがん細胞の増殖と染色体不安定化

泛素循环控制的癌细胞增殖和染色体不稳定性

基本信息

批准号：
05151064
负责人：
瀬野悍二
金额：
$ 10.05万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

目的:がん細胞の特性である異常増殖を細胞周期の面で捉え、その制御に関わるユビキチンの代謝サイクルの役割を関連遺伝子の温度感受性変異株を用いて分子遺伝子、生化学の手法により明かにする。1.DNA複製および修復に関わるE2分子種の同定とクローン化を、非許容温度下、E1の変異に起因してユビキチンを受け取れなくなることを指標に、紫外線高感受性を示すE1変異株ts85、tsFT5、tsFS20について行った。2.E1の細胞周期上の発現はmRNA、蛋白質の両レベルで構成的であるが、細胞周期の各期に要求されるE1活性のレベルは各々異なるので、翻訳後修飾による活性調節としてリン酸化を検討した。E1上の特定位置のセリン残基が細胞周期M期に依存してリン酸化され、そのリン酸化はcdc2キナーゼによることをin vitro、in vivo両方で証明した。3.ts85は制限温度下G2期に停止するが、その際、核小体が異常形態を示すことを発見した。すなわち、核小体の中心部に間隙領域ができるが、電子顕微鏡観察によってこの間隙領域には均一サイズの粒子(直径約70nm)が星雲状に存在した。この粒子の実体を明かにすべく解析を進行中であるが、熱応答蛋白質HSP70の関与が蛍光免疫染色によって示唆された。また、G2期停止ts85細胞を許容温度に戻してM期まで進ませ、染色体をギムザ染色したところ、核小体の解離が不完全であることを示す染色体異常が認められ、銀染色、およびrDNAをプローブに用いたFISH及びセントロメア由来の反復配列DNAをプローブにしたFISHで核小体の異常に起因することを確認した。

Objective: to study the characteristics of the cell, the characteristics of the cell, the cell cycle, the temperature sensitivity, the temperature sensitivity, The 1.DNA copy modifies the E2 molecule to determine the molecular weight of E1. At non-volumetric temperature, the cause of E1 is affected. The sensitivity of E1 to ts85, tsFT5, tsFS20 is highly sensitive to UV rays. In the cell cycle of 2.E1, mRNA, protein and protein were detected in different phases of the cell cycle. E1 activity, E1 activity, acidification and acidification were detected. On E1, specific location, residue, cell cycle M-phase dependence, acidification, cdc2 acidification, in vitro, in vivo square. Under the temperature limit of 3.ts85, the temperature of G2 phase will stop, and the normal shape of nucleosome and nucleosome will show that you will see it. In the center of the nucleosome, in the gap field, in the gap field, and in the electron micrograph, all the particles (about 70nm in diameter) are in the shape of a star. The results of particle size analysis, protein HSP70 assay and light immunostaining showed that there was no significant difference between the two groups. Ts85 cell volume temperature stopped in G _ 2 phase, cell volume temperature in M phase progressed, chromosomal DNA stained in M phase, nucleosome dissociated, nucleosome dissociated, chromosomal DNA dissociated and stained. The reason for this is that the reason for this is to configure the DNA, the nucleosome, the nucleosome, the cause, the FISH, the nucleosome, the nucleos