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ユビキチン系酵素変異株を用いた哺乳類細胞の誘導性修復能の研究

利用泛素酶突变体研究哺乳动物细胞的诱导修复能力

基本信息

批准号：
06263214
负责人：
瀬野悍二
金额：
$ 1.15万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ユビキチン活性化酵素E1温度感受性変異株tsFS20は非許容温度下主としてS期に停止する。2.その際、in vivo DNA合成能が急速に低下するが、RNAおよび蛋白質合成能は正常であった。3.lysolecithin処理によるpermeabilized cellsを用いたin vitro DNA合成活性の測定によって、本変異株のDNA合成装置は基本的には損なわれていないことが示唆された。4.非許容温度に16h培養した後の細胞内dNTP poolを測定したところ、dCTPとdTTPの著しい低下がみられた。対照に用いたDNA polymerase aのts変異株tsFT20(S期停止)ではそのような低下はなかった。また、親株細胞をアフィデイコリン処理してDNA合成を阻害しても細胞内dNTP poolの低下はない。5.したがって、ユビキチン系がde novoデオキシヌクレオチド代謝・合成経路の制御を通してS期進行に関与していることが示唆された。特に、リボヌクレオチド還元酵素を中心とした律速系がユビキチン化の標的である可能性が高い。6.また、本変異株はMNNGやUVに高感受性を示す一方、誘発突然変異頻度は逆に低下する。この表現型は、出芽酵母rad6(ユビキチン結合酵素UBC2の変異)の表現型に似ている。7.しかし、本tsFS20株はE1酵素の変異株であり、複数のE2分子種へのユビキチン転送能が損なわれていることが十分考えられる。したがって、1-5)の表現型と6)の表現型の統一的な説明は今後の解析結果による。

1. Activation of enzyme E1 temperature-sensitive mutant FS20 is stopped at non-allowable temperature. 2. DNA synthesis in vivo is rapidly decreasing, RNA synthesis and protein synthesis are normal. 3. Lysolecithins were used to determine DNA synthesis activity in vitro. 4. After 16h incubation, the intracellular dNTP pool was measured and the concentration of dCTP and dTTP decreased. DNA polymerase a and its variant FT20 (S phase stop) are used in response to low levels of DNA polymerase. DNA synthesis is inhibited by the treatment of the parent cells and the reduction of the intracellular dNTP pool. 5. The regulation of metabolism and synthesis pathway is related to the progress of metabolism and synthesis. In particular, the probability that the enzyme will be converted to the target is high. 6. The frequency of MNNG and UV is low. This phenotype is similar to that of budding yeast rad6, which binds to the enzyme UBC2. 7. The 20 strains of FS have different E1 enzyme variants, and the E2 molecular species have different transmission energy. A unified explanation of phenotypes 1-5) and phenotypes 6) is presented in the following analysis results.