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ユビキチンサイクルが支配するがん細胞の増殖と染色体不安定化

泛素循环控制的癌细胞增殖和染色体不稳定性

基本信息

批准号：
04151062
负责人：
瀬野悍二
金额：
$ 9.28万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.マウスFM3A細胞より分離したユビキチン活性化酵素E1温度感受性変異株の変異点の決定:マウスE1の完全長cDNAをクローン化し、全塩基配列を決定した。11株のE1変異株について変異点をRNA-PCRによって決定したところ、(イ)全てcoding領域、しかもヒト、マウス、コムギ、出芽酵母間で共通アミノ酸である部位が変わっていた。また、(ロ)変異点はE1蛋白質のC末端側半分の領域に集中していた。2.変異E1とE2分子種との相互認識の変化の解析:S期進行に異常をもつE1変異株を用いてS期に必須な蛋白質のユビキチン化を仲介すると思われるE2分子種を、非許容温度におけるE1からE2への標識ユビキチンの転送反応の低下としてみつけた。そのクローン化が急がれる。3.E1酵素のリン酸化による活性調節の検討:E1mRNA量は細胞周期で変動が見られなかった。一方、大腸菌で発現したマウスE1はcdc2キナーゼによってin vitroでリン酸化され、活性は2倍以上に増加した。また、in vivoでE1のリン酸化を確認した。4.サイクリンのユビキチン化と細胞周期との関係:大腸菌で発現され精製したヒトサイクリンBのユビキチン結合を精製したE1とE2を用いて検討したが、明瞭な結合を確認できなかった。このことは、サイクリンBがcdc2キナーゼと結合状態のときのみユビキチン化される可件性を示す。5.姉妹染色分体交換(SCE)遺伝子の同定:CHO細胞から分離した高頻度SCE温度感受性変異株の変異を相補するヒト遺伝子をクローン化し構造決定したところ、RNAポリメラーゼIIのlargest subunitと同定された。その因果関係についての検討が急がれる。

1. Isolation of FM3A cells and determination of temperature sensitive variant of enzyme E1: determination of complete length cDNA of enzyme E1 The differences between the 11 E1 strains are determined by RNA-PCR. The common amino acid and amino acid sites among all the coding fields, such as Shikamut, Mausu, Kuomu, and budding yeasts are determined by RNA-PCR. The C-terminal half of the E1 protein is concentrated in the domain of the E1 protein. 2. Analysis of the mutual recognition of different E1 and E2 molecular species:S phase progress is abnormal, E1 and E2 molecular species are abnormal, S phase is necessary for protein conversion, and E2 molecular species are abnormal. It is urgent to change the situation. 3. The regulation of E1 enzyme activity: the amount of E1mRNA changes with the cell cycle. The activity of E. coli was increased by more than 2 times. In vivo, E1 is acidified. 4. The relationship between cell cycle and cell cycle: Escherichia coli development, purification, E1, E2, identification, identification, identification. The feasibility of the combination state is shown in the table below. 5. Identification of SCE gene:CHO cell separation, high frequency SCE temperature sensitivity, diversity, complementary DNA sequence, structural determination, RNA sequence, II largest subunit and identification. The cause and effect relationship between the two sides is very urgent.