X線解析で解明された立体構造に基づくインタ-フェロンの制癌活性の構造活性相関

基于X射线分析阐明的3D结构干扰素抗癌活性的构效关系

• 批准号: 03152047
• 负责人: 三井 幸雄
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nagaoka University of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03152047/
• 关键词: インタ-フェロン; サイトカイン; X線解析; 構造一活性相関; 蛋白質の構造; 蛋白質工学

[1]本年度の成果(1)Mu・IFNーβの結晶を更に作成し、より高分解能のX線回折デ-タを収集し、立体構造の精密化をやり直した。(2)Hu・IFNーβの立体構造を、コンピュ-タ-・グラフィックス(既有)上で類推した。Hu・IFNーβはMu・IFNーβと約40%のアミノ酸配列上のホモロジ-があるので両者のポリペプチド鎖の基本構造は同一と見なした。実際、側鎖の入れ換えの後、エネルギ-計算等を行うことにより、十分信頼出来る結果が得られた。(3)Hu・IFNーα及びβについては、既に外国で部位特異的変異による生物活性への影響が若干調べられているので、これを上記の(2)の結果にもとずいてトポロジカルに整理しなおし、Hu・IFNーβについて我々が行う蛋白質工学的改変の方針を立てた。(4)Hu・IFNーβのクロ-ニング、発現、抽出、精製の技術は既に東レ(株)基礎研に於て確立されている。そこで、上記の(3)の方針に基ずき、種々のアミノ酸残基を改変したIFN(Hu・IFN´ーβ)を調製した。(5)上記の(4)で得られた種々の改変IFNの生物活性を調べた。主な結果として、1)IFNーβの構造中で、最も揺らぎの大きいル-プであるCDル-プは、血液中で、蛋白分解酵素による攻撃を受けて、IFNーβの生物活性の消失の原因となっている可能性がある。そこで、このル-プ中の5残基を取り除いてみた。その結果は、蛋白質としての発現が困難となったり、in vitroの活性が逆に低下したりした。2)CDル-プ等に糖鎖をつけて、蛋白分解酵素による攻撃を防ぐべく、数カ所にAsnーxーSer(またはThr)の配列を導入してみた。Asp73をAsn73に変えた改変体では、in vitroの活性が不変であった。In vivoの成績が楽しみである。3)Arg33、Asn37、Glu43、Tyr132、Lys136、Arg147、Arg152の側鎖の重要性が確認された。

[1]Results of this year (1) Improved crystallization of Mu·IFN-β, X-ray reflection of high resolution energy, and refinement of three-dimensional structure (2)Hu·IFN-β stereostructure, - Hu·IFN-β Mu·IFN-β ~ In the end, the side lock is replaced by the side lock, the side lock is replaced by the side lock, and the side lock is replaced. (3)Hu·IFN-α and IFN-β are regulated by site-specific variations in the biological activity of human beings. As a result of (2) above, policies for protein engineering reform have been established. (4)Hu·IFN-β production, discovery, extraction, purification technology is established in the basic research of Dongli (strain). In addition, the above-mentioned policies include the modification of IFN(Hu·IFN β) residues in the base, seed and amino acid residues. (5)The above mentioned (4) results show that the biological activity of IFN can be modulated by different kinds of IFN. The main results are as follows: 1) The structure of IFN-β is in the middle of the body, the most important part of the body is in the body. 5 residues in As a result, protein production is difficult and activity in vitro is low. 2)CD-1 and so on sugar lock, proteolysis enzyme attack, prevention, number, Asn-x-Ser(Thr) alignment, prevention Asp73 Asp 73 Asp 73 In vivo results 3) The importance of side locks of Arg33, Asn37, Glu43, Tyr132, Lys136, Arg147, Arg152 was confirmed.