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プロテアーゼとその蛋白性インヒビターの系から見た酵素蛋白改変の立体精造的基礎

从蛋白酶及其蛋白质抑制剂系统角度探讨酶蛋白修饰的立体精制基础

基本信息

批准号：
63616505
负责人：
三井幸雄
金额：
$ 0.96万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)62年度報告書の第1)項のように改良した自動回析計を使って、freeのSSIの結晶について、1.85A^^0分解能のX線回析強度データを収集し、結晶学的な構造精密化をやり直した。この結果、各原始のゆらぎの程度の指標であるβ-ファクターの信頼出来る値が得られた。このデータから、例えば、SSIの65〜70番目の残基は抗原性決定部位の最有力候補であることが示唆される。このことを実験的に検証しようとの試みが、東大・薬学部・荒田研に於て進行中である。2)62年度報告書の第2)項に述べた。SSIのcomplex形成に伴う、global conformation changeの機構を調べるにあたって、SSI-Subtilisin複合体の結晶構造の精度が不足していることが痛感された。今年度はシンクロトロン放射光と坂部式巨大分子用ワイセンベルグ・カメラの使用により、上記結晶について、1.8A^^0の非常に良いX線回析強度データの収集に成功したので、これを使って構造の精度を格段に上げつつある。3)62年度報告書の第3)項に述べた、蛋白工学的に改良したSSIによると、標的酵素との相互作用の様子については、computer graphicsによる予測を実験的に検証すべく、P1残基(Met73→Lys)及び、P4残基(Met70→Gly)のmutantをとり、subtilisinとの複合体の結晶化を試みている(東大・工学部・三浦研、都立大・甲斐荘研、と共同)。

1)62 The improvement of automatic analyzer in item 1) of annual report enables the crystallization of free SSI, the X-ray analysis intensity of 1.85 A ^^0 decomposition energy, and the structural refinement of crystallography. The result is that the index of the original degree of separation can be obtained. The most potent candidate for antigenicity determining site is the residue of SSI 65 ~ 70. This is the first time that we've seen this. 2)62 This is stated in paragraph 2 of the Annual Report. The mechanism of SSI complex formation and global conformation change is not accurate enough. This year's X-ray analysis intensity of the radiation-induced light emission of the large molecular structure is very good, and the crystal structure is very accurate. 3)62 In Item 3 of the Annual Report, the improvement of protein engineering, SSI, target enzyme and interaction factors, computer graphics, prediction and implementation, P1 residue (Met73 →Lys) and mutant of P4 residue (Met70 →Gly), and crystallization of subtilisin complexes were discussed (Tohoku Engineering Department, Miura Research Institute, Toitsu University, Kaiso Research Institute, and Joint).