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ノンヘム型の2価鉄イオンを含む2原子酸素添加酵素の超高分解能X線結晶構造解析

含非血红素二价铁离子双加氧酶的超高分辨率X射线晶体结构分析

基本信息

批准号：
10129206
负责人：
三井幸雄
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Nagaoka University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1. LigABの立体構造解析LigABは、class IIIのextradiol型dioxygenaseに分類され、我々が過去にその構造を明らかにしてきたclass IIのextradiol型dioxygenaseとは一次構造上の類似性が全く認められない。今回、我々は、世界に先駆けLigABの立体構造を重原子同型置換法により2.2Å分解能で解明することに成功した。その結果、全体構造はClass IIのextradiol型dioxygenaseとは全く異なるが、活性中心の構造は互いに類似していることが明らかになった。その結果、これら2つのclassの酵素は、同一の反応を行うために収束進化をしてきていることが明らかになった。2. PheBの立体構造解析PheBは、Class IIのextradiol型dioxygenaseであるが、既に構造を決定しているBphCとは、基質特異性が異なっていることが知られている。そこで、基質特異性の違いを立体構造的に解明するためにPheBの立体構造解析を行った。PheBの結晶は、非常に薄く、実験室系での回折データ収集は困難であったため、放射光を利用して回折データの収集を行った。立体構造解析は分子置換法によって行った。現在、2.8Å分解能での構造精密化、及び更に高分解能のデータを収集するための実験を行っている。3. BPhC-基質-NOの複合体の構造解析に向けての準備上記の3元複合体の結晶を作成するためには、無酸素状態での実験が不可欠である。そこで、無酸素状態を達成するための装置を作成し、3元複合体結晶や作成の準備を行った。

1. The three-dimensional structure analysis of LigAB is based on the classification of class III extradiol-type dioxygenases in LigAB and the similarity of class II extradiol-type dioxygenases in LigAB in primary structure. Now, we have successfully solved the problem of heavy atom homotypic substitution in three-dimensional structure of LigAB. As a result, the structure of the whole Class II is completely different, and the structure of the active center is similar. As a result of this, the enzyme of the class 2 is the same as the enzyme of the class 2. 2. PheB's three-dimensional structure analysis PheB, Class II extradiol-type dioxygenase, both structure determination, matrix specificity, different, different, The analysis of the three-dimensional structure of PheB is carried out in detail. PheB crystal, very thin, solid room system, reflection, reflection Stereostructural analysis and molecular substitution method Now, 2.8 "resolution energy, structural precision, and higher resolution energy, the implementation of the collection of data. 3. The structure analysis of BPhC-matrix-NO complex and the preparation of 3-element complex crystal are discussed. The preparation of the three-element complex crystal was carried out.