课题基金 / 基金详情

ノンヘム型の2価鉄イオンを含む-2原子酸素添加酵素の超高分解能X線結晶構造解析

ノンヘム型の2価鉄イオンを含む-2原子酸素添加酵素の超高分解能X線結晶構造解析
含非血红素二价铁离子的双原子加氧酶超高分辨率X射线晶体结构分析
批准号：
09235210
负责人：
三井 幸雄
金额：
$1.09万
依托单位：
Nagaoka University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1997 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09235210/
关键词：
ノンヘム鉄2原子酸素添加酵素ジオキシゲナーゼX線解析蛋白結晶学蛋白精造ビフェニル分解代謝系PCB分解代謝系

项目摘要

项目成果

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本研究では、活性中心の鉄イオンの周囲の電子密度(特に電子の局在化の様子)を1.2Å以上の高分解能で可視化する事を目的としている。本年度は、まず第一に高分解のX線回折像を与える良質の結晶の作成を、精製条件の再検討も含めて行った。具体的には精製段階においてイオン交換カラムの容量等、使用法を最適化することで、以前に比べて純度の高い蛋白質サンプルを得ることに成功した。更に、結晶化条件に関しても、より大粒の結晶を得るために、再検討を行った。その結果、現在までのHangind drop法からBatch法に変更することで、より大粒の結晶を得ることに成功した。以上に加え、高分解能回折データを測定するには、X線による結晶の損傷を最低限に押さえる必要がある。このためには、超低温での回折強度測定が効果的と考え、超低温(100K)での回折強度測定の為の条件検討を行った。その結果、BphC酵素の結果を30%のエチレングリコールを含む標準緩衝液(BphC酵素の結晶の保存溶液)に浸すことで、良好なデータ測定が可能なことを見出した。また、活性型(活性中心の鉄イオンが2価の状態)での構造解析を行うためには、無酸素的に結晶化を行い、活性中心の鉄イオンの酸化を防ぐ必要がある。このために、高度に酸素を取り除いた状態で結晶化を行うための装置を設計し、これを作成した。
期刊论文(2)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Nandhagopal,N., Senda,T., Hatta,T., Yamada,A., Masai,E., Fukuda,M. & Mitsui,Y.: "Three-dimensional structure of microbial 2-hydroxy-6-oxo-6-phenylhexa-2,4-dienole acid (HPDA) hydrolase (BphD enzyme) from Rhodococcus sp. stratin RHA I,in the PCB degradatio
Nandhagopal,N.、Senda,T.、Hatta,T.、Yamada,A.、Masai,E.、Fukuda,M.
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Mitsui,Y. & Senda,T.: "Elucidation of the basic three-dimensional structure of Type I interferons and its functional and evolutionary implications." J.Interferon and Cytokine Res.17. 319-326 (1997)
三井，Y.
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
電子伝達系とカップルする2原子酸素添加酵素のX線結晶構造解析と構造活性相関
  • 批准号：
    10490017
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
  • 资助金额：
    $6.78万
  • 财政年份：
    1998
  • 负责人：
    三井 幸雄
  • 依托单位：
    Nagaoka University of Technology
ノンヘム型の2価鉄イオンを含む2原子酸素添加酵素の超高分解能X線結晶構造解析
  • 批准号：
    10129206
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
  • 资助金额：
    $1.22万
  • 财政年份：
    1998
  • 负责人：
    三井 幸雄
  • 依托单位：
    Nagaoka University of Technology
機能探索分子設計の為のアクチビン情報伝達系を構成する蛋白質の立体構造の解明
  • 批准号：
    09273218
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $1.28万
  • 财政年份：
    1997
  • 负责人：
    三井 幸雄
  • 依托单位：
    Nagaoka University of Technology
超高分解能立体構造解析を目指した蛋白質結晶化方法の開発
  • 批准号：
    09878126
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 资助金额：
    $1.22万
  • 财政年份：
    1997
  • 负责人：
    三井 幸雄
  • 依托单位：
    Nagaoka University of Technology
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