遺伝子工学で量産されたインターロイキン2とβーインターフェロンの立体構造の解明

阐明基因工程批量生产的白细胞介素2和β-干扰素的三维结构

• 批准号: 62015022
• 负责人: 三井 幸雄
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62015022/
• 关键词: 立体構造; X線解析; タンパク質の立体構造; インターロイキンー2; βーインターフェロン; インターフェロン; 遺伝子工学

1)X線自動回折計のソフトウェアの改良 : 遺伝子工学で量産されたタンパク質の結晶には, その規則性,機械的強度等に難点がある落合が多い. このような結晶を相手とするX線回折データ収集の問題に対処するために, 農水省・生物研の回転対陰極型自動回折計の測定ソフトウェアの改良を行い, 24時間で5,700反射の測定を可能とした.2)インターロイキンー2(ILー2) : 従来単に"板状結晶"として記述していた結晶には, 斜方晶系のものと単斜晶系のものの二種類が存在することが分った. この両者の間の最も顕著な差は, そのb軸の長さの差にある. 今後は, 単斜晶系のものについて解析を進めることとした. この単斜晶系の結晶について本格的な回折データ収集を始めたところ, データ収集中に格子定数が最大2%も変化する現象に悩まされた. 現在, その原因を探るべく, X線照射前と後の結晶の成分のHPLCによる分析を行っている.3)βーインターフェロン(IFNーβ) : 先に斜方晶系の結晶を得ることに成功したが, この結晶によるX線回折強度データ収集は, 結晶の乱れや, 双晶形成の傾向によって著しい困難に遭遇した. 後に結晶化母液のジオキサン濃度を2〜3%に上げることにより, 六方晶系(空間群P6)の新型結晶を得ることに成功した. この結晶は, 分解能も良く, X線照射にも安定である. 既に, 上記1)のシステムによる"native"回折強度データの収集を終り, 現在, 重原子同型置換体の探索を行っている.

1) Improvement of X-ray automatic folding counter ソフトウェア stage: Heritage 伝 sub engineering で production さ れ た タ ン パ ク qualitative の crystallization に は, そ の regularity, the mechanical strength of に difficulties が あ る left が い. こ の よ う な crystalized を hand と す る X-ray inflexion デ ー タ 収 sets の に 処 seaborne す る た め に, the ministry, biological research の back planning polices cathode type automatic inflexion の determination ソ フ ト ウ ェ ア の improved を い, 24 time で5,700 reflectivity <s:1> determination を may と た た.2) <s:1> タ タ ロ キ キ キ 2(IL キ 2) : 従 to 単 に "tabular crystal" と し て account し て い た crystallization に は, orthorhombic system の も の と 単 inclined crystal system の も の の exist two kinds が す る こ と が points っ た. こ の who struck between の の most も 顕 な poor は, そ の b long axis の さ の poor に あ る. The next は 単 inclined crystal system の も の に つ い て parsing を into め る こ と と し た. こ の 単 inclined crystal system の crystallization に つ い て in this case the な inflexion デ ー タ 収 set を beginning め た と こ ろ, デ ー タ 収 concentrated に lattice constant が maximum 2% も variations change す る phenomenon に 悩 ま さ れ た. Now, そ の reason を agent る べ く, X-ray irradiation before と after crystallization の の composition の HPLC に よ る line analysis を っ て い る. 3) beta ー イ ン タ ー フ ェ ロ ン (interferons ー beta) : First に orthorhombic system の crystallization を have る こ と に successful し た が, こ の crystallization に よ る X-ray intensity of inflexion デ ー タ は 収 set, crystal の disorderly れ や, twinning の tendency に よ っ て in し い difficult に encounter し た. に after crystallization mother liquor の ジ オ キ サ を ン concentration on 2 ~ 3% に げ る こ と に よ り, hexagonal system (space group P6) の new crystallization を must る こ と に successful し た. こ の crystallization は, can decompose も く, X-ray irradiation に も settle で あ る. Both に, written 1) の シ ス テ ム に よ る "native" inflexion strength デ ー タ の 収 set を り, now, heavy atoms with type line replacement body の explore を っ て い る.

项目成果

C.Sano,Y.Mitsui,Y.Iitaka et al.: Proceedings of the Japan Academy. 62B. 209-211 (1985)

C.Sano，Y.Mitsui，Y.Iitaka 等：日本学士院学报。

S.Matsuda,G.Kawano,S.Itoh,Y.Mitsui,Y.Iitaka: Journal of Biological Chemistry. 26. 16207-16209 (1985)

S.Matsuda，G.Kawano，S.Itoh，Y.Mitsui，Y.Iitaka：生物化学杂志。

K.Ishikawa,S.Itoh,Y.Mitsui & Y.Iitaka: Proceedings of the Symposium on Threeーdimensional Structures and Drug Action. 165-175 (1987)

K.Ishikawa、S.Itoh、Y.Mitsui 和 Y.Iitaka：三维结构和药物作用研讨会论文集 165-175 (1987)。