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機能探索分子設計の為のアクチビン情報伝達系を構成する蛋白質の立体構造の解明

機能探索分子設計の為のアクチビン情報伝達系を構成する蛋白質の立体構造の解明
阐明构成激活素信号转导系统的蛋白质的三维结构，用于功能探索和分子设计
批准号：
09273218
负责人：
三井 幸雄
金额：
$1.28万
依托单位：
Nagaoka University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1997 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09273218/
关键词：
アクチビン情報伝達系機能探索分子設計蛋白精造蛋白結晶学

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项目成果

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精製したActivinとfollistatinを用いてActivin-follistatin複合体の結晶化を試みた。結晶化は、スクリーニングキットを使用して行った。しかし、結晶を得ることができなかった。そこで、沈殿剤として、硫安、PEGを使用して網羅的に結晶化条件の探索を行い、千以上の条件を探索したが、やはり結晶を得ることは出来なかった。これは、follistatinに糖鎖が付加していることが結晶化に悪影響を及ぼしていると考えられる。そこで、糖鎖を持たないfollistatinを作成して結晶化を行うことにした。具体的には、site-directed-mutagenesisで糖鎖付加部位であるアスパラギン酸に変異を導入することでアラニンに変換し、これをバキュロウイルスを用いた発現系を用いて発現させることを農水省・蚕糸昆虫研の冨田博士の協力を得て行った。その結果、本発現系により活性をもつ糖鎖の除去されたfollistatinを生産することが可能なことを確認した。現在、結晶化に使用するための大量精製の条件を検討している。また、T7プロモータを用いてActivin受容体の細胞内に存在するkinase domainの発現系を構築し、大腸菌BL21(DE3)による発現を試みた。しかし、発現量が少なく、結晶化に使用可能な程度の大量な蛋白質を得ることが出来ていない。現在、培養条件の検討を含め、大量精製するための条件検討を行っている。
期刊论文(4)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Mitsui,Y. & Senda,T.: "Elucidation of the basic three-dimensional structure of Type I interferons and its functional and evolutionary implications." J.Interferon and Cytokine Res.17. 319-326 (1997)
三井，Y.
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Nandhagopal,N., Senda,T., Hatta,T., Yamada,A., Masai,E., Fukuda,M. & Mitsui,Y.: "Three-dimensional structure of microbial 2-hydroxy-6-oxo-6-phenylhexa-2,4-dienolc acid (HPDA) hydrolase (BphD enzyme) from Rhodococcus sp. stratin RHA I,in the PCB degradatio
Nandhagopal,N.、Senda,T.、Hatta,T.、Yamada,A.、Masai,E.、Fukuda,M.
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
電子伝達系とカップルする2原子酸素添加酵素のX線結晶構造解析と構造活性相関
  • 批准号：
    10490017
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
  • 资助金额：
    $6.78万
  • 财政年份：
    1998
  • 负责人：
    三井 幸雄
  • 依托单位：
    Nagaoka University of Technology
ノンヘム型の2価鉄イオンを含む2原子酸素添加酵素の超高分解能X線結晶構造解析
  • 批准号：
    10129206
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
  • 资助金额：
    $1.22万
  • 财政年份：
    1998
  • 负责人：
    三井 幸雄
  • 依托单位：
    Nagaoka University of Technology
超高分解能立体構造解析を目指した蛋白質結晶化方法の開発
  • 批准号：
    09878126
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 资助金额：
    $1.22万
  • 财政年份：
    1997
  • 负责人：
    三井 幸雄
  • 依托单位：
    Nagaoka University of Technology
キセノンガスを利用した普遍的かつ容易な蛋白結晶構造解析法の開発
  • 批准号：
    09559005
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
  • 资助金额：
    $5.89万
  • 财政年份：
    1997
  • 负责人：
    三井 幸雄
  • 依托单位：
    Nagaoka University of Technology
海外基金