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機能探索分子設計の為のアクチビン情報伝達系を構成する蛋白質の立体構造の解明

阐明构成激活素信号转导系统的蛋白质的三维结构，用于功能探索和分子设计

基本信息

批准号：
09273218
负责人：
三井幸雄
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Nagaoka University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

精製したActivinとfollistatinを用いてActivin-follistatin複合体の結晶化を試みた。結晶化は、スクリーニングキットを使用して行った。しかし、結晶を得ることができなかった。そこで、沈殿剤として、硫安、PEGを使用して網羅的に結晶化条件の探索を行い、千以上の条件を探索したが、やはり結晶を得ることは出来なかった。これは、follistatinに糖鎖が付加していることが結晶化に悪影響を及ぼしていると考えられる。そこで、糖鎖を持たないfollistatinを作成して結晶化を行うことにした。具体的には、site-directed-mutagenesisで糖鎖付加部位であるアスパラギン酸に変異を導入することでアラニンに変換し、これをバキュロウイルスを用いた発現系を用いて発現させることを農水省・蚕糸昆虫研の冨田博士の協力を得て行った。その結果、本発現系により活性をもつ糖鎖の除去されたfollistatinを生産することが可能なことを確認した。現在、結晶化に使用するための大量精製の条件を検討している。また、T7プロモータを用いてActivin受容体の細胞内に存在するkinase domainの発現系を構築し、大腸菌BL21(DE3)による発現を試みた。しかし、発現量が少なく、結晶化に使用可能な程度の大量な蛋白質を得ることが出来ていない。現在、培養条件の検討を含め、大量精製するための条件検討を行っている。

Crystallization of Activin Folistatin Complex Crystallization is carried out by using SKURIAKINKIKIKIET.しかし、结晶を得ることができなかった。The conditions for crystallization are explored in detail. The effect of crystallization on sugar content and follistatin content was studied. The sugar chain is formed by crystallization. The specific site-directed mutation of the sugar chain is introduced into the reaction system of the Ministry of Agriculture and Water Resources and the Ministry of Insect Research. As a result, this discovery is confirmed by the removal of sugar locks from follistatin production. Now, the crystallization of the use of a large number of purification conditions are discussed. Construction of a system for the production of kinase domain in cells containing Activin and Escherichia coli BL21 (DE3) The amount of crystallization is small, the amount of crystallization is large, and the amount of protein is large. Now, culture conditions are discussed, a large number of refined conditions are discussed