课题基金 / 基金详情

超高分解能立体構造解析を目指した蛋白質結晶化方法の開発

超高分解能立体構造解析を目指した蛋白質結晶化方法の開発
开发用于超高分辨率三维结构分析的蛋白质结晶方法
批准号：
09878126
负责人：
三井 幸雄
金额：
$1.22万
依托单位：
Nagaoka University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1997 至 1998
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09878126/
关键词：
結晶化精製X線結晶構造解析蛋白結晶学蛋白構造

项目摘要

项目成果

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中文摘要
翻译
本研究においては、高精度な蛋白質のX線結晶構造解析に必要とされる良質の結晶を作成するための方法を幾つかのサンプル(BphB,BnzB,BphC,BphD,LigAB,EtbC等)を用いて検討した。1.蛋白質の純度と得られる結晶の関係の検討幾つかの蛋白質においては、サンプルとして使用する蛋白質の純度が不十分な場合でも結晶を得ることが可能である。しかしながら多くの場合、そのようなサンプルを用いて結晶化を行うと双晶が生じてしまう。本研究では、蛋白質サンプルの精製度を上げることで(具体的には、精製条件の再検討を行うことで)、双晶の生成をかなりの確立で抑制できることを示すことができた。具体的には、BnzB,BphDにおいて、精製条件を改良することにより、双晶の発生を押さえることに成功した。また、結晶化条件は同一でも精製条件を変えれば、サンプルの純度に大きな差が無い場合でも、得られる結晶の質が異なることがありえるということが、EtbCを使用した実験から示された。2.結晶化の方法の検討通常の条件でX線回折データを収集するには、結晶の大きさはある程度大きいほうが良い結果を与えることが多い。そこで、いったん結晶が得られた後、結晶化の方法を変更することで大きな結晶を得る試みを行った。その結果、良く用いられるHanging drop法の代わりにBatch法を採用することでより大きな結晶を容易に得られることが多いことが、BphC,BphD等を使用した実験から明らかにすることができた。
英文摘要
本研究においては、高精度な蛋白質のX線結晶構造解析に必要とされる良質の結晶を作成するための方法を幾つかのサンプル(BphB,BnzB,BphC,BphD,LigAB,EtbC等)を用いて検討した。1.蛋白質の純度と得られる結晶の関係の検討幾つかの蛋白質においては、サンプルとして使用する蛋白質の純度が不十分な場合でも結晶を得ることが可能である。しかしながら多くの場合、そのようなサンプルを用いて結晶化を行うと双晶が生じてしまう。本研究では、蛋白質サンプルの精製度を上げることで(具体的には、精製条件の再検討を行うことで)、双晶の生成をかなりの確立で抑制できることを示すことができた。具体的には、BnzB,BphDにおいて、精製条件を改良することにより、双晶の発生を押さえることに成功した。また、結晶化条件は同一でも精製条件を変えれば、サンプルの純度に大きな差が無い場合でも、得られる結晶の質が異なることがありえるということが、EtbCを使用した実験から示された。2.結晶化の方法の検討通常の条件でX線回折データを収集するには、結晶の大きさはある程度大きいほうが良い結果を与えることが多い。そこで、いったん結晶が得られた後、結晶化の方法を変更することで大きな結晶を得る試みを行った。その結果、良く用いられるHanging drop法の代わりにBatch法を採用することでより大きな結晶を容易に得られることが多いことが、BphC,BphD等を使用した実験から明らかにすることができた。
期刊论文(0)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Sugimoto,K.,Senda,T.,Aoshima,H.Masai,E.,Fukuda,M.& Mitsui,Y.: "Crystal structure of an aromatic-ring-opening dioxygenase LigAB which is a protocatechuate 4,5-dioxygenase." Structure. (in Press). (1999)
杉本，K.，千田，T.，青岛，H.马西，E.，福田，M.
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Mitsui,Y. & Senda,T.: "Elucidation of the basic three-dimensional structure of Type I interferons and its functional and evolutionary implications." J.Interferon and Cytokine Res.17. 319-326 (1997)
三井，Y.
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Sugimoto,K,Aoshima,H.,Senda,T.,Masai,E,Fukuda,M.& Mitsui,Y: "Purification and crystallization of a protocatecuate 4,5-dioxygenase LigAB from sphingomonas paucimobilis SYK-6" Protein and Peptide Letters. in Press. (1999)
杉本K、青岛H、千田T、马西E、福田M。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Tanabe,T.,Tanaka,N.,Nonaka,T.,Mitsui,Y.,Yoshimoto,T.et al.: "Roles of the Ser146,Tyr159 and Lys163n the catalyticaction of 7α-hydroxysteroid dehydrogenase." J.Biochem.(Tokyo). 124. 634-641 (1998)
Tanabe, T.、Tanaka, N.、Nonaka, T.、Mitsui, Y.、Yoshimoto, T. 等人：“Ser146、Tyr159 和 Lys163n 在 7α-羟基类固醇脱氢酶催化作用中的作用 J.Biochem”。 （东京）124。634-641（1998）。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
共 6 条
    電子伝達系とカップルする2原子酸素添加酵素のX線結晶構造解析と構造活性相関
    • 批准号：
      10490017
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
    • 资助金额：
      $6.78万
    • 财政年份：
      1998
    • 负责人：
      三井 幸雄
    • 依托单位：
      Nagaoka University of Technology
    ノンヘム型の2価鉄イオンを含む2原子酸素添加酵素の超高分解能X線結晶構造解析
    • 批准号：
      10129206
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
    • 资助金额：
      $1.22万
    • 财政年份：
      1998
    • 负责人：
      三井 幸雄
    • 依托单位：
      Nagaoka University of Technology
    機能探索分子設計の為のアクチビン情報伝達系を構成する蛋白質の立体構造の解明
    • 批准号：
      09273218
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $1.28万
    • 财政年份：
      1997
    • 负责人：
      三井 幸雄
    • 依托单位：
      Nagaoka University of Technology
    キセノンガスを利用した普遍的かつ容易な蛋白結晶構造解析法の開発
    • 批准号：
      09559005
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
    • 资助金额：
      $5.89万
    • 财政年份：
      1997
    • 负责人：
      三井 幸雄
    • 依托单位：
      Nagaoka University of Technology
    海外基金