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セラチアセリンプロテア-ゼの大腸菌における菌体外分泌機構の解明とその応用

セラチアセリンプロテア-ゼの大腸菌における菌体外分泌機構の解明とその応用
大肠杆菌沙雷丝氨酸蛋白酶胞外分泌机制的阐明及其应用
批准号：
03660104
负责人：
吉田 稔
金额：
$0.96万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1991 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03660104/
关键词：
菌体外分泌セリンプロテア-ゼ大腸菌外膜青色銅蛋白質

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1)セラチアセリンプロフア-ゼ感熟酵素のC末端アミノ酸残基の固定培地中に分泌された成熟酵素を精製後、臭化シアンで分解し、SDSPAGEから溶出することによりC末端蛋白を取得した。これをさらにリジルエンドペプチダ-ゼで完全消化し、HPLCによって分取した全ポリペプチドをN末端から配列決定することにより本酵素のC末端アミノ酸は、645Aspであることを明らかにした。2)分泌に伴うプロセス部位の決定本酵素が外膜透過の際にうけるプロセスに関しては、失活変異遺伝子や大腸菌OmpT^-株などを用いた実験により、(1)成熟酵素自身のプロテア-ゼ活性により645D,701E,716Gの各アミノ酸の直後でプロセスが起こること、(2)宿主大腸菌のOmpTにより675Rの直後でプロセスされること、(3)宿主大腸菌の他のプロテア-ゼにより689Qの直後でプロセスが起こることを見いだした。3)異種蛋白分泌の試み脱窒菌の電子伝達に関わる蛋白、青色銅蛋白と本酵素の種々の融合蛋白について検討したところ、本酵素前駆体C末ドメインとの融合蛋白では、外膜に挿入されるC末ドメインの働きにより青色銅蛋白が外膜外側まで輸送され培地側に露出したような形で存在することが示された。また、青色銅蛋白とC末ドメインのC末側半分との融合蛋白では、青色銅蛋白が培地中に検出された。このことから大腸菌外膜に挿入され安定に存在するC末ドメインの性質を利用し、異種蛋白の分泌が行なえる可能性が示されたものと考えられる。
期刊论文(1)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
S.Shikata: "Processing specificity of the precursor of Serratia serine protease for exretion through the outer membrane of Escherichia coli" Journal of Biochemistry.
S.Shikata：“沙雷氏菌丝氨酸蛋白酶前体通过大肠杆菌外膜排泄的加工特异性”《生物化学杂志》。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
専門家と非専門家の違いを考慮した科学的テキスト分析に関する研究
  • 批准号：
    24K15193
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 资助金额：
    $2.83万
  • 财政年份：
    2024
  • 负责人：
    吉田 稔
  • 依托单位：
    The University of Tokushima
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