薬剤標的分子同定のための分裂酵母ケミカルゲノミクス

用于药物靶分子鉴定的裂变酵母化学基因组学

• 批准号: 16658039
• 负责人: 吉田 稔
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16658039/
• 关键词: 分裂酵母; ケミカルゲノミクス; Gateway; ポストゲノム; 標的分子

分裂酵母は細胞周期研究のモデル生物として有名であるが、ゲノム配列が決定されると、わずか4,900の遺伝子しか持たない、これまでに知られる最もゲノムサイズの小さな真核生物であることが判明した。にもかかわらず、イントロンや発現調節などは出芽酵母より高等真核生物に近く、驚くべきことに100種類以上ものヒト疾病医関連遺伝子が保存されており、ケミカルゲノミクスを行うための優れた生物である。我々のグループは、世界に先駆けてこの分裂酵母全遺伝子ORFのGateway法によるクローン化に成功した。そこで取得した4,900のORFを誘導可能なプロモーターによって分裂酵母内で発現させ、これを利用して薬剤標的分子同定のための基盤技術を確立することを目的とした。取得したORFの全てについて誘導発現が可能なnmt1プロモーターの制御下におき、C-末端にHis6-Flagという短いタグを連結した発現ベクターを作製し、分裂酵母のleu1-32遺伝子座にインテグレーションさせた形質転換株を作製した。全遺伝子の98%にあたる約4800遺伝子について形質転換株が取得された。これら全ての形質転換株について1つずつHisタグ抗体によるウェスタンブロット解析を行った結果、4300以上のクローンで発現が確認された。得られた発現クローンを用いて、標的分子がわかっている既存薬(フルコナゾール)に対する感受性が、標的分子あるいはそのパスウェイの過剰発現によって変化するかどうかを確認した。その結果、フルコナゾールの標的であるエルゴステロール合成に関与するシトクロムP-450の過剰発現株はフルコナゾール耐性となることが確認された。したがって本研究により、分裂酵母ポストゲノムを用いたケミカルゲノミクスが可能であることが示された。

Split は yeast cell cycle research の モ デ ル biological と し て famous で あ る が, ゲ ノ ム match column が decided さ れ る と, わ ず か 4900 の heritage 伝 son し か hold た な い, こ れ ま で に know ら れ る most も ゲ ノ ム サ イ ズ の small さ な eukaryotes で あ る こ と が.at し た. に も か か わ ら ず, イ ン ト ロ ン や 発 now adjust な ど は budding yeast よ り higher eukaryotes に nearly く, jing く べ き こ と に more than 100 kinds も の ヒ ト disease cure masato even heritage 伝 son が save さ れ て お り, ケ ミ カ ル ゲ ノ ミ ク ス を line う た め の optimal れ た biological で あ る. I 々 の グ ル ー プ は, world first に 駆 け て こ の split yeast totally survived 伝 ORF の Gateway method に よ る ク ロ ー ン change に successful し た. そ こ で obtain し た 4900 の ORF を induced may な プ ロ モ ー タ ー に よ っ て division within the yeast で 発 now さ せ, こ れ を using し て 薬 one of target molecules with fixed の た め の base plate technology を establish す る こ と を purpose と し た. Obtain し た ORF の full て に つ い て induced 発 が may now な nmt1 プ ロ モ ー タ ー の under the system of imperial に お き, C - end に His6 - Flag と い う short い タ グ を link し た 発 now ベ ク タ ー を cropping し, split yeast の leu1-32 heritage 伝 stroma に イ ン テ グ レ ー シ ョ ン さ せ た form quality planning in strains を as the し た. The entire remains of 伝 offspring 98%にあたる approximately 4800 remains of 伝 offspring に が て て morphology 転 were replaced with が to obtain された. こ れ ら full て の form quality planning in plant に つ い て 1 つ ず つ ihs タ グ antibody に よ る ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ ト parsing line を っ た results, more than 4300 の ク ロ ー ン で 発 が now confirmed さ れ た. Have ら れ た 発 now ク ロ ー ン を with い て, the underlying molecular が わ か っ て い る existing 薬 (フ ル コ ナ ゾ ー ル) に す seaborne る susceptibility が, the underlying molecular あ る い は そ の パ ス ウ ェ イ の through turning 発 now に よ っ て variations change す る か ど う か を confirm し た. そ の results, フ ル コ ナ ゾ ー ル の mark で あ る エ ル ゴ ス テ ロ ー ル synthetic に masato and す る シ ト ク ロ ム P - 450 の turning 発 now strains は フ ル コ ナ ゾ ー ル patience と な る こ と が confirm さ れ た. し た が っ て in this study に よ り, split yeast ポ ス ト ゲ ノ ム を with い た ケ ミ カ ル ゲ ノ ミ ク ス が may で あ る こ と が shown さ れ た.

项目成果

pDUAL, a multipurpose, multicopy vector capable of chromosomal integration in fission yeast

• DOI: 10.1002/yea.1181
• 发表时间: 2004-11-01
• 期刊: YEAST
• 影响因子: 2.6
• 作者: Matsuyama, A;Shirai, A;Yoshida, M
• 通讯作者: Yoshida, M