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卵母細胞翻訳系による運動ニュ-ロン栄養因子産生のin vivo系での検定

卵母细胞翻译系统产生运动神经元营养因子的体内测定

基本信息

批准号：
03670069
负责人：
樫原康博
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

運動ニュ-ロンの生存は胎生期から一生を通して筋由来の栄養因子に依存することはよく知られているが、この因子は未だ同定されていない。本研究は、筋のmRNAを抽出しこれをツメガエル卵母細胞で翻訳させて得られる分泌タンパクが、運動ニュ-ロン栄養因子活性を持つかをin vivoにおいて検討することを目的とした。この目的のために、テストステロン投与したラット陰部筋あるいは運動ニュ-ロン自然細胞死期の鶏卵胚下肢筋よりmRNAを抽出した。このmRNAを卵母細胞に注入し、発現された分泌タンパク液を鶏卵に投与し、in vivoにおいて運動ニュ-ロン自然細胞死が阻止されるかを検討した。その結果、ラット会陰筋も鶏卵下から得たmRNAの発現タンパクも共に自然細胞死を有意に抑制した。従って、これらのmRNAより合成されたタンパクが栄養因子候補と考えられる。さらに会陰筋mRNAを庶糖密度勾配遠心法により3分画したところ、18Sと28Sの間のフクラションに栄養因子活性があった。用いたin vivoアッセイ法と筋は当初の予定と若干異なっているが本件の目的は達成されたと考えられる。(当初予定したラット坐骨神経切断端への適用では、分泌液のチュ-ブへの吸着とリ-クによる消失が激しいため、上記のin vivoアッセイ法に切り換えた。またラット横隔膜筋よりテストステロン投与会陰筋のほうが、栄養因子のmRNAの増幅が期待されることが我々の研究室より明らかにされた(Araki等、J.Neurosci.'91)ためこの筋を用いた。さらに、自然細胞死期の鶏胚の下肢筋がラット筋に比べ、約10倍mRNA産生することを確認したので、この筋をも追加検討した)。現在、Thoenenn等のグル-プが確立した運動ニュ-ロンの培養法を改良したin vitroアッセイ系を確立したので、これと本件で確立したin vivoアッセイ系とを併用して栄養因子のクロ-ニングを試みている。

The survival of the movement is dependent on the survival of the fetus, the survival of the muscle, and the survival of the muscle. The aim of this study was to extract muscle mRNA from oocytes and to investigate the activity of motor and regulatory factors in vivo. The purpose of this study is to extract mRNA from the tissues of the embryo. This mRNA is injected into the oocyte and secreted into the oocyte in vivo. As a result, the expression of mRNA was deliberately suppressed in natural cells.従って、これらのmRNAより合成されたタンパクが栄养因子候补と考えられる。In addition, the expression of mRNA in the perineal tendon is closely related to the concentration of glucose, and the activity of nutrient factors in the middle of 18S and 28S is closely related to the concentration of glucose in the perineal tendon. The purpose of this article is achieved by using the method of "in vivo" and "in vivo." (The application of the sciatic nerve cutting end was originally determined. The secretion of the sciatic nerve was absorbed and disappeared. The above mentioned in vivo was changed.) The results showed that the expression of mRNA in the perineal tendon was significantly higher than that in the transvaginal tendon (Araki et al., J. Neurosci. '91) In addition, the natural cell death rate of the lower limb muscle is about 10 times higher than that of the lower limb muscle. Now, Thoenn et al.'s culture method has been improved to establish a culture system in vivo.