筋由来運動ニューロン栄養因子のcDNAクローニング

肌源性运动神经元营养因子的 cDNA 克隆

• 批准号: 05680731
• 负责人: 樫原 康博
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05680731/
• 关键词: 運動神経細胞; 栄養因子; 筋; cDNA; クローニング; にわとり胚

胎生期の運動神経細胞の生存は筋由来の栄養因子に依存すると仮定されているがこの因子の同定は未だ成功していない。自然細胞死期の鶏胚の下肢筋より抽出したmRNAをアフリカツメガエル卵母細胞に注入することで発現する分泌蛋白を自然細胞死期の鶏胚(chick embryo in ovo)に投与すると腰髄運動神経の自然細胞死が阻止されることを見いだした。さらに、分泌蛋白は、培養運動神経細胞の生存を促進した。これらのの結果をNeurosci.Lett.に投稿した。この実験系をアッセイ系として下肢筋由来運動神経栄養因子のcDNAクローニングを企画した。この目的のために、先ず、蔗糖密度勾配法により栄養因子活性蛋白を生産するmRNA分画を得た。ついで、京都大学医学部中西研究所で、このmRNA分画を用いて、cDNAライブラリーを作成した。40万pfuのライブラリーの作成に成功した。この作成したcDNAライブラリーの中に、栄養因子活性を持つ蛋白を発現するcDNAが存在するかを検討するために、cDNAライブラリーのファージを増殖させcDNAを精製した。この精製cDNAを用いてin vitroでcRNAを作成し、これを卵母細胞に注入した。mRNAの時と同様に、これによって発現する分泌蛋白を培養運動神経細胞に適用し、生存が促進するかを検討した。その結果、cRNAの代わりに、蒸留水を卵母細胞に注入して得られた蛋白を投与した群に比べ、cRNA由来分泌蛋白投与群の運動神経細胞の生存数が有意に増加した。従って、運動神経細胞の栄養因子活性を有する蛋白をコードするcDNAを含むライブラリーを作成できたと結論され、本件の研究計画が達成された。

The survival of fetal motor neurons depends on the origin of the nutrient factors, and the identity of these factors has not been successfully determined. Natural cell death is prevented by the secretion of protein from the oocyte. The secretion of protein promotes the survival of cultured neurons. The results of this study were published in Neurosci.Lett. The cDNA library of the motor neurotrophic factor of the lower extremity muscle was designed. The aim of this study was to obtain mRNA expression for the production of active protein of nutritional factors by sucrose density matching method. Kyoto University School of Medicine, Institute of Western Medicine, Kyoto University, Kyoto University 400,000 pfu and the success of the production. This cDNA was created to express protein in the medium and in the presence of growth factors, and the cDNA was purified. The purified cDNA was produced in vitro and injected into oocytes. mRNA expression is related to the secretion of protein in cultured neurons. As a result, cRNA production and evaporation increased significantly in the number of oocytes injected with protein and population compared with cRNA production and population. The results show that there is a gene expression in the protein that regulates the activity of cell growth factors.

项目成果

Y.Kashihara,C.Takasu,M.Kano: "Messenger RNAs from chick muscle encode a motoneuronal survival promoting factor"

Y.Kashihara、C.Takasu、M.Kano：“来自小鸡肌肉的信使 RNA 编码运动神经元存活促进因子”