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生後におけるラット運動ニューロンの生存因子の研究

大鼠运动神经元出生后存活因素的研究

基本信息

批准号：
62570067
负责人：
樫原康博
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

生後約50日目に左側横隔膜神経を切断したラット横隔膜筋(除神経筋)を術後5日目に摘出し, これを24時間培養した. その培養後の液(CM)を濃縮し, シリコンチューブに充填し, 生後4日目に切断した左側坐骨神経の中枢端を挿入した. 3日に1度の割合で液交換し, 術後2週目にL4-L5レベルで脊髄を摘出した. 摘出した脊髄を半蔵し, 術側と正常側のコリンアセチルトランスフェラーゼ(ChAT)活性を比較した. その結果, CMの代りに, 生理食塩水を与えた場合の術側のChAT活性は, 正常側に比べ平均72%に減少していた. CMを与えた場合は, 80%と増大の傾向を示したが有意差はなかった. この傾向は, 除神経しないで培養液に横隔膜筋のCMでも見られ, 除神経筋に特異的ではなかった. この結果に対する一つの可能性として, CMの濃縮液に含まれる運動ニューロン生存因子がごく微量のため有意差が出ないと考えられる. この可能性の検討は, 生存因子に対するアフィニティークロマトが出来れば容易となる. 1984年, Gurneyは, 筋萎縮性側索硬化症(ALS)患者血清が筋から放出される運動ニューロン栄養因子と抗原抗体反応すると報告している. この報告が正しければ, ALS患者のイムノグロブリンを用いて生存因子のアフィニティークロマトが可能であるので, Gurneyの追試を行った. 彼は, CMを電気泳動し, Western blot後, ALS血清と反応させると56Kdaltonのタンパクと特異的な結合が見られると報告しているが, 我々は, 56K以外にも, 48K,64K,76Kに著明なバンドを見た. しかも, 正常人血清を用いた場合にも, 56Kにバンドが見られた. 従って, 我々は, ALS血清を特異的に結合するタンパクを確認する事は出来なかった. (これらの結果は, 国際ALS会議において報告した). よって, 現在, 生存因子濃縮のために, 分子量によって, CMを分画し, それらの効果について, 実験中である.

About 50 days after birth, the left diaphragm was cut off and the diaphragm tendon (except for the nerve tendon) was extracted 5 days after surgery and cultured for 24 days. The culture medium (CM) was concentrated, and the central end of the left sciatic nerve was cut off 4 days after birth. 1 degree cut and fluid exchange on the 3rd day, L4-L5 cut and ridge extraction 2 weeks after operation. A comparison of the activity between the two sides was made. As a result, the ChAT activity on the physiological side decreased by an average of 72% compared with that on the normal side. CM and the occasion, 80% of the increase in the tendency to show differences. This tendency is opposite, except for the culture medium, the diaphragm muscle CM is not visible, except for the nerve muscle specific. The results show that CM concentrate contains a small amount of exercise and survival factors. The probability of death is high, and the survival factor is low. In 1984, Gurney reported that serum from patients with ALS was released from muscles, exercise, nutritional factors and antigen antibodies. This report shows that ALS patients are likely to be treated with a survival factor, Gurney's follow-up test. After Western blot, ALS serum was purified by electroporation at 56 K dalton and specific binding was reported at 56K, 48K,64K,76K. The normal human serum is used in the middle of the case, 56K. The ALS serum is specific to the patient. (This is the result of the International ALS Conference).よって, 现在, 生存因子浓缩のために, 分子量によって, CMを分画し, それらの効果について, 実験中である.