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運動ニューロンに対する筋由来栄養因子cDNAのクローニング

运动神经元肌源性营养因子 cDNA 的克隆

基本信息

批准号：
06680821
负责人：
樫原康博
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

運動神経細胞の生存や機能維持はその支配標的筋との結合に依存する。この現象は、運動神経細胞の生存を促進する標的筋由来栄養因子によって規定されていると仮定されているがその実体は未だ不明である。従って、運動神経細胞の生存機能維持研究のフロンティアはこの因子の同定であることは疑いない。我々は、鶏胚下肢筋よりmRNAを抽出し、これをアフリカツメガエル卵母細胞に注入することで発現する分泌性の翻訳蛋白が、in vivoとinvitroの鶏胚運動神経細胞の生存を促進することを明らかにした。この結果は、運動神経細胞の生存を規定する筋由来の拡散性因子のmRNAが、事実、胎生期の下肢筋で産生されていることを示唆する。次に、このmRNAを蔗糖密度勾配遠心法により得た栄養因子活性分画mRNAからcDNAライブラリーを作成し、このcDNAからcRNAを作成し上記の卵母細胞に注入して得られた翻訳蛋白も上記の運動神経細胞の生存を促進した。この結果は、ライブラリー中に栄養因子cDNAが存在することを意味する。このライブラリーcDNAを先ず、40分画(10000pfu)に分画し、それぞれの分画cDNAよりcRNAを作成した。これを、上記の卵母細胞翻訳系に投与して得られた分泌蛋白が運動神経細胞の生存を促進するかを指標にして活性分画をスクリーニングした。得られた活性分画cDNAをさらに、細分画(3000pfu)して同様の方法で活性分画を求めた。さらに、1000pfu分画し、現在600pfuまで絞り込めた。同様の作業を繰り返すことで単一cDNAが得られることは疑いないと考えられた。

The survival and function maintenance of motor neurons depend on the combination of control targets. This phenomenon is related to the regulation of the survival of motor neurons, and the regulation of the survival of motor neurons. A Study on the Maintenance of Survival Function of Neurons and Motor Cells The expression of secretory protein in oocytes is enhanced by gene expression in vivo and in vitro. The results indicate that the mRNA of the scattered factors that regulate the survival of motor neurons, and the production of the lower limb muscles during the fetal period Next, the mRNA was injected into the oocyte to obtain the protein and promote the survival of the motor neuron. The results indicate that the cDNA of the growth factor exists in the genome. The cDNA sequence of this gene was generated in 40 minutes (10000pfu). The above mentioned oocyte turnover system is characterized by secretion of protein and activity index. The activity of the cDNA fragment was determined by the same method.さらに、1000pfu分画し、现在600pfuまで绞り込めた。The same work is done in the same way as in the same way.