权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

モノクロ-ナル抗体を用いたインスリン受容体チロシンキナ-ゼ測定系の開発

使用单克隆抗体开发胰岛素受体酪氨酸激酶测量系统

基本信息

批准号：
03671150
负责人：
横野浩一
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

上記研究課題の測定系の開発のため、まずインスリン受容体に対するモノクロ-ナル抗体を作製した。免疫原としてバキュロバイラスをベクタ-としsf9細胞にインスリン受容体のαサブユニットを大量に発現させたのちアフィニティ精製した蛋白を用いた。一方、リン酸化チロシンに対するモノクロ-ナル抗体の作製のために、免疫原としてチロシンリン酸化酵素をコ-ドする衡遺伝子ab1を大腸菌に発現させ、大腸菌中の蛋白をチロシンリン酸化させた菌体破砕物を用いた。両抗体とも一連の細胞融合法、スクリ-ニング、クロ-ニングという過程を経て、良好な各種ハイプリド-マが得られた。これらのハイブリド-マから分泌されるモノクロ-ナル抗体を精製し、これを用いてヒト赤血球のインスリン受容体キナ-ゼ活性の測定系をenzymeーlinked immcmosorbent assay(ELISA)を用いて確立した。まずヒト赤血球をin vivoでインスリン処理後、赤血球ghostを作製し、1%Triton Xー100で可溶化したものを検体とした。ELISAはマイクロタイタ-プレ-トにモノクロ-ナルインスリン受容体抗体を固層化後、検体中のインスリン受容体を吸着させモノクロ-ナルリン酸化チロシン抗体をビオチン化後加え、この抗体の結合をペルオキシダ-ゼ・アビチンを用いて測定した。標準検体はヒトインスリン受容体を過剰発現したCHOT細胞をインスリン処理後、ホスフォチロシン抗体カラム、WGAカラケで精製したものを用いた。その結果、インスリン処理により赤血球インスリン農度で認められた。全血400μlからの希釈試験は80μlまで標準曲線と平行化し、回収試験は95〜102%の範囲内であり、interassay,intraassayも5〜12%(CV値)と良好であった。

The above research subject is the development and production of anti-tumor antibodies for the receptor. The immunogen is produced in large quantities in the form of a receptor. A method for the production of antibodies, immunogens, and enzymes for the production of proteins in Escherichia coli Antibodies and cell fusion methods, rapid response, rapid response The enzyme linked immcmosorbent assay(ELISA) was used to determine the activity of the antibody. The red blood cells were dissolved in 1% Triton X 100. After immobilization of the receptor antibody, adsorption of the receptor antibody in the sample, addition of the antibody after immobilization, and determination of the binding of the antibody. The standard cell culture medium is used for the development of CHOT cell culture medium and WGA cell culture medium. The results of the study are as follows: Whole blood 400μl, normal curve 80μl, parallel curve 95 ~ 102%, interassay,intraassay 5 ~ 12%(CV) Good.

项目成果

期刊论文数量（2）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

志伊光瑞,横野浩一,西村隆一郎,小川渉,米沢一仁,春日雅人,馬場茂明: "Vーabl oncogene productを用いた単クロ-ン性ホスホチロシン抗体の作製" 医学のあゆみ. 158. 221-222 (1991)

Kozui Shii、Koichi Yokono、Ryuichiro Nishimura、Wataru Okawa、Kazuhito Yonezawa、Masato Kasuga、Shigeaki Baba：“使用 V-abl 癌基因产物制备单克隆磷酸酪氨酸抗体”，医学史。221-222 (1991)。