中枢神経系のタキキニン受容体サブタイプの研究とこれに基づいた薬物開発

中枢神经系统速激肽受体亚型研究及基于该研究的药物开发

• 批准号: 05557117
• 负责人: 大塚 正徳
• 金额: $ 4.29万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05557117/
• 关键词: 摘出脊髄標本; タキキニン; タキキニン受容体; 中枢神経; タキキニン受容体拮抗薬; 大脳初代培養; スクリーニング; アセチルコリン

中枢タキキニン受容体サブタイプの特性を解明し、それに基づいて有用なタキキニン作用薬または拮抗薬のスクリーニングを行なった。1.電気生理学的実験:テトロドトキシン存在下に新生ラット摘出脊髄標本にタキキニンを適用し、前根より脱分極を記録し用量反応曲線を得、これに対する拮抗薬の効果を定量的に求めた。末梢組織標本と異なり、NK-1拮抗薬はニューロキニンA(NKA)による応答に対しより高い親和性を示した。一方サブスタンスP(SP)による反応は高濃度においては却って拮抗薬存在下で増強された。2.生化学的分析:NKAによるアセチルコリン放出はNK-1拮抗薬によって抑制され、一方SPによる放出は抑制されなかった。これは電気生理の結果とよく一致し、以上より脊髄においてNKAに感受性の高いNK-1サブタイプの存在が示唆された。3.遺伝子クローニング:脊髄において特異的なサブタイプが存在することが電気生理・生化学的実験から示唆されたので、RT-PCRを用いた遺伝子クローニングを行なった。得られたDNA断片はほとんどがNK-1とNK-3で、NK-2は少量であった。新しいサブタイプはまだ見いだせていない。4.大脳初代培養系による検討:生後3-4日のラットの大脳皮質神経細胞を単離し、グリア細胞をフィーダーとして数週間培養した。この初代培養系を用いてパッチクランプ法でタキキニンの作用を観察したが、明らかな応答は得られなかった。5.スクリーニング:分子モデリングによって設計、合成された化合物を最初にIM-9培養細胞系を用いてスクリーニングした。この中からSP結合阻害活性の高いものを脊髄標本を用いてさらに検討したが電気応答に対して有効なものは得られていない。

Central タ キ キ ニ ン by let body サ ブ タ イ プ の features を interpret し, そ れ に base づ い て useful な タ キ キ ニ ン role 薬 ま た は antagonism against 薬 の ス ク リ ー ニ ン グ を line な っ た. 1. Electric 気 physiology be 験 : テ ト ロ ド ト キ シ ン に freshmen in the presence of ラ ッ ト pick the spinal marrow specimen に タ キ キ ニ ン を し, ventral root よ り points off so を record し dosage curve of reverse 応 を, こ れ に す seaborne る antagonism against 薬 の unseen fruit を quantitative に o め た. Peripheral tissue samples と different な り, NK 1 antagonist 薬 は ニ ュ ー ロ キ ニ ン A (NKA) に よ る 応 answer に し seaborne よ り い high affinity を shown し た. One party サ ブ ス タ ン ス P (SP) に よ る anti 応 は high concentration に お い て は but っ て antagonism against 薬 で raised in the presence of strong さ れ た. 2. Biochemistry analysis: NKA に よ る ア セ チ ル コ リ ン release は NK 1 antagonist 薬 に よ っ て inhibit さ れ, one party SP に よ る released は control さ れ な か っ た. こ れ は electrical physiological の 気 results と よ く consistent し, above よ り spinal marrow に お い て NKA に sensitivity high の い NK 1 サ ブ タ イ プ の is が in stopping さ れ た. 3. Heritage 伝 son ク ロ ー ニ ン グ : spinal marrow に お い て specific な サ ブ タ イ プ が exist す る こ と が electric 気 physiological, biochemical be 験 か ら in stopping さ れ た の で, rt-pcr を with い た heritage 伝 son ク ロ ー ニ ン グ を line な っ た. A small amount of であった was obtained from られたDNA fragments ほとん ほとん が がNK-1とNK-3で and NK-2 であった. New サブタ サブタ プ まだ まだ まだ see だせて な な な. 4. Big 脳 original training department に よ る 検 beg: 3-4 days after the date of birth の ラ ッ ト の big god 経 脳 cortex cells を 単 し, グ リ ア cells を フ ィ ー ダ ー と し て weeks between training し た. こ の を original training department with い て パ ッ チ ク ラ ン プ method で タ キ キ ニ ン の role を 観 examine し た が, Ming ら か な 応 は must answer ら れ な か っ た. 5. ス ク リ ー ニ ン グ : molecular モ デ リ ン グ に よ っ て design and synthesis of さ れ た compound を を に IM - 9 cultivate cell line with initial い て ス ク リ ー ニ ン グ し た. こ の in か ら SP combined with high resistance against active の い も の を を spinal marrow specimen with い て さ ら に beg し 検 た が electric 気 応 answer に し seaborne て have sharper な も の は have ら れ て い な い.

项目成果

Suzuki H.and Otsuka M.: "Methods in neurotransmitter and neuropeptide research." Elsevier, 443-455 (1993)

Suzuki H.和 Otsuka M.：“神经递质和神经肽研究方法”。

Zhao F.-Y.et al.: "Involvement of NK_1 receptors in synaptic transmission in the guinea pig coeliac ganglion." Neurosci.Res.18. 245-248 (1993)

赵 F.-Y. 等人：“NK_1 受体参与豚鼠腹腔神经节突触传递。”

Suzuki H.et al.: "Pharmacological characteristics of tachykinin receptors mediating acetylcholine release from neonatal rat spinal cord." Eur.J.Pharmacol.241. 105-110 (1993)

Suzuki H.et al.：“速激肽受体介导新生大鼠脊髓乙酰胆碱释放的药理学特征。”

Guo J.-Z.et al.: "Depression of primary afferent-evoked responses by GR71251 in the isolated spinal cord of the neonatal rat." Br.J.Pharmacol.110. 1142-1148 (1993)

Guo J.-Z.et al.：“GR71251 在新生大鼠离体脊髓中抑制初级传入诱发反应。”

Otsuka M.et al.: "The Tachykinin Receptors." Humana Press, in press (1994)

Otsuka M.et al.：“速激肽受体”。