NMRを用いた紫外線損傷DNA修復機構の構造生物学的解析

使用 NMR 对紫外线损伤 DNA 修复机制进行结构生物学分析

• 批准号: 14026013
• 负责人: 嶋田 一夫
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14026013/
• 关键词: 安定同位体標識; 多次元NMR法; CPD photolyase; 光回復酵素; NMR

安定同位体標識DNA光産物の調製に成功し、多次元NMR法によるNMRシグナル帰属が完了した。高度好熱菌由来のCPD photolyase(阪大・院理・倉光博士より大腸菌発現系が供与された)を題材として、紫外線損傷DNA (CPD)と修復酵素の相互作用を原子レベルで明らかにしている。CPD photolyaseの精製法については、従来法に改善を加え、活性体の効率的精製に成功した。光回復酵素との複合体におけるCPDのNMRシグナル帰属を進めるとともに、安定同位体標識法の確立を行った。DNA-酵素複合体のような高分子量複合体では、上記の解析で用いた^<13>C、^<15>N標識試料以外に、さらに^2H標識を施したCPDを調製する必要がある.この三重標識CPDと光回復酵素との複合体の多次元多核種NMR解析を行うことで、標識CPDのNMRシグナルの帰属を行い、NOEやスピン結合などのNMR構造情報をもとに複合体形成時におけるCPDのコンホメーションの決定を行った。さらに、変異体による解析や蛍光標識DNAなどを用いて構造情報を確認し、修復酵素による損傷部位の特異的認識メカニズムおよび反応機構を明らかにした。

The stable isoster-labeled DNA photoproduct <s:1> modulation に was successful に, and the multi-dimensional NMR method によるNMRシグナ 帰 帰 genera が were completed た た た. Highly origin の CPD photolyase hot bacteria (e. big courtyard, Dr Richard · kuramitsu よ り coliform 発 now is が さ and supply れ た) を subject と し て (CPD) と, uv damage DNA repair enzyme の を interaction between atoms レ ベ ル で Ming ら か に し て い る. The refining of CPD photolyase by に に に て て に and 従 methods に to improve を and え, and the refining of active body <s:1> efficiency に was successful た. Light response enzyme と の complex に お け る CPD の NMR シ グ ナ ル 帰 genus を into め る と と も に, stable isotopic body line identification method の established を っ た. DNA - enzyme complex の よ う な high molecular weight complex で は, written の parsing で with い た ^, ^ < 13 > C < 15 > N logo sample に, さ ら に ^ 2 h logo を shi し た CPD を modulation す る necessary が あ る. こ の triple identity CPD と light response enzyme と の complex の multidimensional multi-core line kind of NMR analytical を う こ と で, logo CPD の NMR シ グ ナ ル の 帰 を rows い, NOE や ス ピ ン combining な ど の NMR structure intelligence を も と に complexes formed に お け る CPD の コ ン ホ メ ー シ ョ ン の decided to line を っ た. さ ら に, - variant に よ る parsing や 蛍 light logo DNA な ど を with い て structure intelligence を confirm し, repair enzyme に よ る injury の specific know メ カ ニ ズ ム お よ び を 応 authorities Ming ら か に し た.

项目成果

Noritaka Nishida: "Novel Collagen-Binding Mode of the VWA Domain Determined"Nature Struct.Biol.. (in press).

Noritaka Nishida：“确定了 VWA 结构域的新型胶原蛋白结合模式”Nature Struct.Biol..（正在出版）。

Tamiji Nakanishi: "Determination of the Interface of a Large Protein Complex by Transferred"J.Mol.Biol. 318. 245-249 (2002)

Tamiji Nakanishi：“通过转移测定大蛋白复合物的界面”J.Mol.Biol。

Yoshimasa Kyogoku: "Structural Genomics of Membrane Proteins"Accounts.Chem.Res.. (in press).

Yoshimasa Kyogoku：“膜蛋白的结构基因组学”Accounts.Chem.Res..（正在出版）。

Koh Takeuchi: "Solution Structure of ω-Grammotoxin SIA, a gating modifier of P/Q and N"J.Mol.Biol.. 321. 517-526 (2002)

Koh Takeuchi：“ω-Grammotoxin SIA 的溶液结构，P/Q 和 N 的门控修饰剂”J.Mol.Biol.. 321. 517-526 (2002)

Yoshitomo Suhara: "Oligomers of Glycamino Acid"Bioorgan.Med.Chem.. 10. 1999-2013 (2002)

Yoshitomo Suhara：“甘氨酸低聚物”Bioorgan.Med.Chem.. 10. 1999-2013 (2002)