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NMRを用いた紫外線損傷DNA修復機構の構造生物学的解析

NMRを用いた紫外線損傷DNA修復機構の構造生物学的解析
使用 NMR 对紫外线损伤 DNA 修复机制进行结构生物学分析
批准号：
14026013
负责人：
嶋田 一夫
金额：
$2.43万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2002 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14026013/
关键词：
安定同位体標識多次元NMR法CPD photolyase光回復酵素NMR

项目摘要

项目成果

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安定同位体標識DNA光産物の調製に成功し、多次元NMR法によるNMRシグナル帰属が完了した。高度好熱菌由来のCPD photolyase(阪大・院理・倉光博士より大腸菌発現系が供与された)を題材として、紫外線損傷DNA (CPD)と修復酵素の相互作用を原子レベルで明らかにしている。CPD photolyaseの精製法については、従来法に改善を加え、活性体の効率的精製に成功した。光回復酵素との複合体におけるCPDのNMRシグナル帰属を進めるとともに、安定同位体標識法の確立を行った。DNA-酵素複合体のような高分子量複合体では、上記の解析で用いた^<13>C、^<15>N標識試料以外に、さらに^2H標識を施したCPDを調製する必要がある.この三重標識CPDと光回復酵素との複合体の多次元多核種NMR解析を行うことで、標識CPDのNMRシグナルの帰属を行い、NOEやスピン結合などのNMR構造情報をもとに複合体形成時におけるCPDのコンホメーションの決定を行った。さらに、変異体による解析や蛍光標識DNAなどを用いて構造情報を確認し、修復酵素による損傷部位の特異的認識メカニズムおよび反応機構を明らかにした。
期刊论文(12)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Noritaka Nishida: "Novel Collagen-Binding Mode of the VWA Domain Determined"Nature Struct.Biol.. (in press).
Noritaka Nishida：“确定了 VWA 结构域的新型胶原蛋白结合模式”Nature Struct.Biol..（正在出版）。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Tamiji Nakanishi: "Determination of the Interface of a Large Protein Complex by Transferred"J.Mol.Biol. 318. 245-249 (2002)
Tamiji Nakanishi：“通过转移测定大蛋白复合物的界面”J.Mol.Biol。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Yoshimasa Kyogoku: "Structural Genomics of Membrane Proteins"Accounts.Chem.Res.. (in press).
Yoshimasa Kyogoku：“膜蛋白的结构基因组学”Accounts.Chem.Res..（正在出版）。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Koh Takeuchi: "Solution Structure of ω-Grammotoxin SIA, a gating modifier of P/Q and N"J.Mol.Biol.. 321. 517-526 (2002)
Koh Takeuchi：“ω-Grammotoxin SIA 的溶液结构，P/Q 和 N 的门控修饰剂”J.Mol.Biol.. 321. 517-526 (2002)
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
共 6 条
    NMRを用いた紫外線損傷DNA修復機構の構造生物学的解析
    • 批准号：
      15023216
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $3.07万
    • 财政年份：
      2003
    • 负责人：
      嶋田 一夫
    • 依托单位：
      The University of Tokyo
    原子レベルでの病態解明に向けたハイスループットな分子間相互作用解析法の開発
    • 批准号：
      15012213
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $3.33万
    • 财政年份：
      2003
    • 负责人：
      嶋田 一夫
    • 依托单位：
      The University of Tokyo
    HIV感染機構の解明:ケモカイン受容体・リガンド相互作用の構造生物学的研究
    • 批准号：
      15019020
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $3.52万
    • 财政年份：
      2003
    • 负责人：
      嶋田 一夫
    • 依托单位：
      The University of Tokyo
    原子レベルでの病態解明に向けたハイスループットな分子間相互作用解析法の開発
    • 批准号：
      14013015
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $3.33万
    • 财政年份：
      2002
    • 负责人：
      嶋田 一夫
    • 依托单位：
      The University of Tokyo
    海外基金