PHF形成における脳cdc2様キナーゼの役割

脑CDC2样激酶在PHF形成中的作用

• 批准号: 05261204
• 负责人: 久永 眞市
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05261204/
• 关键词: 老人性痴呆症; PHF; タウ; cdc2キナーゼ; リン酸化; ニューロフィラメント

Neurofilament-Hサブユニット(NF-H)のリン酸化部位を認識する抗体はPHFタウとも反応することから、NF-HとPHF-tauは同一キナーゼによってリン酸化されていると考えられる。NF-Hをリン酸化するキナーゼを同定、精製し、その性質を調べることにより、PHF形成の仕組みを明らかにすることができるのではないかと考えた。脱リン酸化型NFを基質に用いることにより、NF-Hキナーゼの特異的なアッセイ法が確立できた。この方法を用いてブタ脳抽出液中に存在するNF-Hキナーゼ活性を調べたところ、そのほとんどは微小管分画に回収された。NF-Hキナーゼを微小管分画から各種カラムを用いて精製した。精製NF-Hキナーゼは脳cdc2様キナーゼであるcdk5と同一であることが、cdk5に対する抗体を用いたブロッティングにより示された。NF-HキナーゼはNF-Hのin vivoのリン酸化部位をリン酸化していた。NF-Hキナーゼは正常脳内でtauを最もよくリン酸化しているキナーゼの一つであることが、NF-Hの特異的阻害剤であるbutyrolactone Iを用いた実験より示された。今後は、本キナーゼとPHF形成との関連をより直接的に示すため、神経の分化、老化に伴うキナーゼの発現と活性制御をcDNAや抗体を用いて調べるとともに、リン酸化tauによるPHF形成のin vitro実験系の確立を目指していく予定である。

Neurofilament -h サ ブ ユ ニ ッ ト (NF) -h の リ ン acidification parts を know す る antibody は PHF タ ウ と も anti 応 す る こ と か ら, NF - H と PHF - tau は same キ ナ ー ゼ に よ っ て リ ン acidification さ れ て い る と exam え ら れ る. NF - H を リ ン acidification す る キ ナ ー ゼ を with fixed, refined し, そ の nature を adjustable べ る こ と に よ り, PHF formation の blackstone group み を Ming ら か に す る こ と が で き る の で は な い か と exam え た. Off リ ン に NF を matrix acidizing model い る こ と に よ り, NF - H キ ナ ー ゼ の specific な ア ッ セ が イ method established で き た. こ の way を with い て ブ タ 脳 に exist in the extract す る NF - H キ ナ ー ゼ activity を adjustment べ た と こ ろ, そ の ほ と ん ど は tiny tube points draw に back 収 さ れ た. NF-Hキナ キナ ゼを ゼを microtube dissection ら ら various カラムを are refined by て て た. Refined NF - H キ ナ ー ゼ は 脳 cdc2 others キ ナ ー ゼ で あ る cdk5 と same で あ る こ と が, cdk5 に す seaborne を る antibody with い た ブ ロ ッ テ ィ ン グ に よ り shown さ れ た. NF-Hキナ キナ ゼ をリ NF-H <s:1> in vivo リ <s:1> acidified site をリ <s:1> acidified <s:1> て た た た NF - H キ ナ ー ゼ は within normal 脳 で tau を most も よ く リ ン acidification し て い る キ ナ ー ゼ の a つ で あ る こ と が, NF - H の specific resistance against tonic で あ る butyrolactone を I use い た be 験 よ り shown さ れ た. は in future, the キ ナ ー ゼ と PHF form と の masato even を よ り direct に shown す た め, god 経 の differentiation, aging に う キ ナ ー ゼ の 発 と now active suppression を cDNA を with や antibody い て adjustable べ る と と も に, リ ン acidification tau に よ る PHF form の in vitro be 験 を refers is の established し て い く designated で あ る.

项目成果

Hisanaga,S.: "Tau protein kinase II has a similar characteristic to cdc2 kinase for phosphorylating neurofilament proteins." J.Biolog.Chem.268. 15056-15060 (1993)

Hisanaga,S.：“Tau 蛋白激酶 II 与 cdc2 激酶具有相似的磷酸化神经丝蛋白的特性。”

Hisanaga,S.: "Dephosphorylation of microtubule-binding sites at the neurofilament-H tail domain by alkaline,acid,and protein phosphatases." J.Biochem.113. 705-709 (1993)

Hisanaga,S.：“通过碱性、酸性和蛋白磷酸酶对神经丝 H 尾部结构域的微管结合位点进行去磷酸化。”

Ando,S.: "Phosphorylation of synthetic vimentin peptides by cdc2 kinase." Biochem.Biophyc.Res.Commun.195. 837-843 (1993)

Ando,S.：“cdc2 激酶对合成波形蛋白肽进行磷酸化。”

Ohta,K.: "Microtubule nucleating activity of centrosomes in cell-free extracts from Xenopus eggs:" J.Cell Sci.104. 125-137 (1993)

Ohta,K.：“爪蟾卵无细胞提取物中中心体的微管成核活性：”J.Cell Sci.104。

Hisanaga,S.: "Phosphorylation of native and reassembled neurofilaments composed of NF-L,NF-M,and NF-H by the catalytic subunit of cAMP-dependent protein kinase." Mol.Biol.Cell. 5(in press.). (1994)

Hisanaga,S.：“由 NF-L、NF-M 和 NF-H 组成的天然和重组神经丝被 cAMP 依赖性蛋白激酶的催化亚基磷酸化。”