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哺乳動物脳のニューロフィラメントキナーゼの精製とその性質

哺乳动物脑神经丝激酶的纯化和性质

基本信息

批准号：
04833006
负责人：
久永眞市
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

神経細胞に特異的な中間径繊維であるニューロフィラメントは、神経細胞内で最もリン酸化されている蛋白の一つである。しかし、ニューロフィラメントをリン酸化しているキナーゼについては全く解っていない。本研究では、脱リン酸化したNF蛋白を基質として、ブタ脳からニューロフィラメントのHサブユニット(NFH)を選択的にリン酸化するキナーゼを精製した。ブタ脳から微小管を重合させ、遠心分離したところ、ほとんどのNFHキナーゼ活性は微小管と共に沈澱分画に回収された。NFHキナーゼを微小管分画から高塩濃度溶液で抽出した後、DEAE、ハイドロキシアパタイト、硫安分画、Superose6によるゲルロ過、MonoQ、SPイオン交換の各カラムクロマトグラフィーを通すことにより高度に精製した。最終精製過程による活性とSDS-PAGEによる蛋白の挙動を調べることにより32Kと25Kの2つのサブユニットから成っていることが示された。NFHキナーゼはニューロフィラメントの3つのサブユニットのうち脱リン酸化されたNFHを最もよい基質とした。NFHのin vivoのリン酸部位に対する抗体を用いてブロッティングしたところ、NFHキナーゼによるリン酸化で、抗原性が回復し、NFHキナーゼがNFHのin vivoのリン酸化部位をリン酸化していることが示された。キナーゼの基質としてよく知られている蛋白をいくつか基質として調で、ヒストンH1がよい基質であることが解った。ヒストンH1キナーゼとして知られているcdc2キナーゼとの関連を調べたるため、抗PSTAIR抗体でブロッティングしたが、いずれのサブユニットにも反応しなかった。しかし、cdc2キナーゼと特異的に結合的に結合する酵母のsuc1蛋白とはcdc2キナーゼと同様に結合した。NFHKは神経細胞に特異的なcdc2に関連したキナーゼであると推測された。

Neurocyte-specific mid-range proteins are the most important proteins in neurocytes.しかし、ニューロフィラメントをリン酸化しているキナーゼについては全く解っていない。In this study, we refined the matrix of NF protein by selecting NF protein from NF protein. The micro-tubes overlap, the telecentric separation, the NFH separation and the micro-tubes precipitate separation. NFH is a micro-tube separation process. After extraction, DEAE, UV, UV, The final purification process involves activity, SDS-PAGE and protein movement-modulation at 32K and 25K. NFH is the most basic of all. NFH in vivo acid site of the antibody used in the treatment, NFH in vivo acid site of the antibody used in the treatment, antigenicity recovery, NFH in vivo acid site of the treatment The matrix of the protein is the same as the matrix of the protein. The connection between the H1 and the cdc2 is adjusted, the anti-PSTAIR antibody is developed, and the embedded support is developed. When cdc2 ー binds specifically to yeast, the suc1 protein binds to cdc2 ー in the same way. NFHK is a neurocyte-specific entity.