マウス子宮内膜症モデル発癌過程における多段階遺伝子異常の解析

小鼠子宫内膜异位症模型癌变过程多步遗传异常分析

• 批准号: 05771240
• 负责人: 丹羽 憲司
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 1994
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771240/
• 关键词: 子宮内膜発癌; p53遺伝子; PCR-SSCP法; マウス; direct siequencing法; 点突然変異; MNU; estradiol

我々はN-methyl-N-nitrosourea(MNU)とestradiol(E_2)を用いた、短期マウス子宮内膜発癌モデルを開発した。その後、そのモデルを利用して、estrone(E_1)やestriol(E_3)の内膜発癌に対する影響を検討した所、E_1、E_2、E_3ともに発癌増強的に作用することが明らかとなった。しかし、その発癌メカニズムは依然として不明で、その解明のため、MNUとE_2を用いて発生した内膜腺癌(Adc)と異型増殖症(AtH)においてH-,K-,N-ras遺伝子とp53遺伝子の関与について検索した。[材料と方法]10週齢ICR雌マウスを開腹し、MNU溶液(1mg/100g体重)を左子宮に注入し、右子宮に生食を注入し、MNU投与1週間後よりE_2(5ppm)混餌飼料を投与し、28〜30週にて実験を終了した。培検時に子宮を摘出し、左右とも子宮を半割し、一方は診断用にホルマリン固定後H・E染色した。他方は直ちに凍結・保存し、DNAを抽出し、以下の実験に供した。Adc7例、AtH3例、正常内膜3例に関して、H-,K-,N-ras遺伝子のcodon12,13,61とp53遺伝子のExon5,7,8に関してPCR-SSCP法で変異の有無を検索後、変異の疑われた検体に関してdirect sequencing法にて点突然変異の有無を検索した。[結果]Adc7例中2例のExon 5のcodon 163に点突然変異を認めた[TCA→TGA(Ser→Thr):TCA→TCC(Ser→Arg^+,stop codon)]。AtH、正常内膜にはp53の変異を認めなかった。H-,K-,N-rasのcodon12,13,61のいずれにもAdcやAtHで異常は認められなかった。[結語]MNUとE_2を用いた内膜発癌系ではその発癌の一部にp53の異常が関与しており、しかも、AtHではその異常が認められないので、p53の異常はrate limiting stepであると考えられた。また、この発癌系ではras群の異常の関与の可能性は乏しいと考えられた。

I 々 は N - methyl - N - nitrosourea (MNU) と estradiol (E_2) を い た, short-term マ ウ ス endometrial 発 carcinoma モ デ ル を open 発 し た. After そ の, そ の モ デ ル を using し て, estrone (E_1) や estriol (E_3) の lining 発 carcinoma に す seaborne る influence を beg し 検 た, E_1, E_2, E_3 と も に 発 carcinoma raised strong に role す る こ と が Ming ら か と な っ た. し か し, そ の 発 carcinoma メ カ ニ ズ ム は still と し て unknown で, そ の interpret の た め, MNU と E_2 を with い て 発 raw し た endometrial adenocarcinoma (Adc) と special rights colonization syndrome (AtH) に お い て H -, K -, N - traces of ras 伝 son と p53 heritage 伝 son の masato and に つ い て 検 cable し た. [material と method] 10 weeks 齢 female ICR マ ウ ス し を laparotomy, MNU solution (1 mg / 100 g weight) uterine に injection し を left or right uterus に raw を cast and 1 week after injection し, MNU よ り E_2 (5 PPM) mixed feed を cast bait and し, 28 ~ 30 weeks に て be 験 を end し た. When culturing 検, the に uterus を was removed, the left and right と と uterus を were semi-cut, and one party was <s:1> diagnosed and fixed with にホ に リ リ リ <e:1> <e:1>, followed by H · E staining of the た. The other party directly ちに freezes and preserves <s:1>, DNAを extracts <s:1>, and the following に sample is provided for た た. Adc7 cases, AtH3 cases, normal endometrium in 3 に masato し て, H -, K -, N - traces of ras 伝 son の codon12, 13, 21 と p53 heritage 伝 son の Exon5, 7, 8 に masato し て PCR - SSCP method で variations have different の without を 検 rope, - different の after suspected わ れ た 検 body に masato し て direct sequencing method: Sudden change at にて points indicates whether there is a を検 rope and た. [Result] Among the 7 cases of ADC, 2 cases had Exon 5 codon 163に points suddenly changed を recognized めた[TCA→TGA(Ser→Thr):TCA→TCC(Ser→Arg^+,stop codon)]. AtH, normal endometrium に に p53 <s:1> change を confirmation めな った った. H -, K -, N - ras の codon12, 13, 21 の い ず れ に も Adc や AtH で abnormal は recognize め ら れ な か っ た. [conclusion] the MNU と E_2 を with い た lining 発 carcinoma is で は そ の の a に 発 carcinoma p53 の abnormal が masato and し て お り, し か も, AtH で は そ の abnormal が recognize め ら れ な い の で, p53 の abnormal は rate limiting step で あ る と exam え ら れ た. The occurrence of cancer in また and <s:1> is related to the abnormality of the で また ras group and the lack of its possibility. Youdaoplaceholder2 study えられた.

项目成果

S.Yamagiwa and Kenji Niwa et al.20GB04:Primary adenoid cystic carcinoma of Bartholin's glad:a case report.: Acta Cytol.(in press). (1994)

S.Yamagiwa 和​​ Kenji Niwa 等人。20GB04：原发性前庭大腺样囊性癌：病例报告。：Acta Cytol。（印刷中）。

Higehiro Mori and Kenji Niwa et al.: "Interaction of interferon gamma and CPT-11, a new derivativecamptothecin,in human endometrial carcinoma cell lines." Int.J.Gynecol.Cancer. 3. 36-43 (1993)

Higehiro Mori 和 Kenji Niwa 等人：“干扰素 γ 和 CPT-11（一种新的喜树碱衍生物）在人子宫内膜癌细胞系中的相互作用。”

Kinji Niwa et al.: "Changes of the numbers of silver-stained nucleolar organizer regions in the normal,pre-neoplastic and neoplastic endometrium" Cancer Detect Prev.(in press). (1994)

Kinji Niwa 等人：“正常、肿瘤前期和肿瘤性子宫内膜中银染核仁组织者区域数量的变化”Cancer Detect Prev.（出版中）。

Kenji Niwa et al.: "Rapid induction of endometrial'carcinoma in ICR mice treated with N-methyl-N-nitrosourea and 17beta-estradiol in ICR mice." Jpn.J.Cancer Res.82. 1391-1396 (1991)

Kenji Niwa 等人：“用 N-甲基-N-亚硝基脲和 17β-雌二醇治疗 ICR 小鼠，可快速诱导 ICR 小鼠患子宫内膜癌。”

Kinji Niwa et al.: "Enhancing effets of estrogens on endometrial carcinogensis initiated by N-methy 1-N-nitrosurea in ICR mice." Jpn.J.Cancer Res.84. 951-955 (1993)

Kinji Niwa 等人：“在 ICR 小鼠中增强雌激素对 N-甲基 1-N-亚硝基脲引发的子宫内膜癌的影响。”