c-Metチロシン・キナーゼを介した細胞内情報伝達機構の解析

c-Met酪氨酸激酶介导的细胞内信号转导机制分析

• 批准号: 05780538
• 负责人: 駒田 雅之
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780538/
• 关键词: 肝細胞増殖因子; scatter factor; c-met癌原遺伝子産物; 受容体; チロシン・キナーゼ; シグナル伝達

Scatter factor/hepatocyte growth factor(SF/HGF)の細胞分散、細胞運動性亢進作用のシグナル伝達における、その受容体c-met癌原遺伝子産物(c-Met)の細胞内チロシン・キナーゼ領域の機能を明かにするために、上皮細胞増殖因子(EGF)受容体の細胞外領域とc-Metの細胞内領域からなるキメラ受容体EMR、およびEMRの細胞内c-Metチロシン・キナーゼのATP結合部位であるLys-1108をAlaに置換した変異受容体K1108A、主要自己リン酸化部位であるTyr-1233をPheに置換した変異受容体Y1233Fを、SF/HGFの標的細胞であるマウス・メラノーマ細胞株B16-F1に発現させ、各受容体発現細胞のEGFに対する応答と各受容体のチロシン・キナーゼ活性について解析した。各受容体発現細胞のEGFに対する応答を調べた結果、EMR発現細胞はEGF刺激により細胞どうしが互いに分散し、またその運動性が亢進していた。これに対しK1108A、Y1223F変異受容体発現細胞ではEGFに対する応答は観察されなかった。発現細胞をEGF刺激した時の各受容体のチロシン自己リン酸化を調べた結果、K1108Aのリン酸化は検出されず、Y1223Fのリン酸化もEMRのそれの約4%に低下していた。免疫沈降した各受容体のin vitroでのキナーゼ活性をミエリン塩基性蛋白を基質として測定した結果、K1108Aの活性は全く検出されず、Y1223Fの活性もEMRのそれの約3%にまで低下していた。さらに発現細胞をEGF刺激した時の細胞内蛋白質のチロシン・リン酸化を抗ホスホチロシン抗体によるイムノブロッティングで解析した結果、EMR発現細胞において観察された分子量115kDaと110kDaの蛋白質のリン酸化は、K1108A、およびY1223F発現細胞では検出されなかった。以上の結果より、SF/HGFの細胞分散、運動性亢進作用のシグナルはc-Metの細胞内領域のチロシン・キナーゼ活性化により伝達されること、そしてそのチロシン・キナーゼ活性化には主要自己リン酸化部位(Tyr-1233)のチロシン・リン酸化が重要な役割を果たしていることが示された。

Scatter factor/hepatocyte growth Factor (SF/HGF) の cells scattered, cell motility hyperthyroidism の シ グ ナ ル 伝 da に お け る, そ の cancer among let body c - met the original heritage 伝 zi chan content (c - met) の intracellular チ ロ シ ン · キ ナ ー の ゼ field function を Ming か に す る た め に factor (EGF), epithelial cells raised colonization by let body の extracellular domain と c - Me T の intracellular domain か ら な る キ メ ラ let body EMR, お よ び EMR の cell c - Met チ ロ シ ン · キ ナ ー ゼ の ATP binding site で あ る Lys - 1108 を Ala に replacement し た - different capacity K1108A, mostly their リ ン acidification parts で あ る Tyr - 1233 を Phe に replacement し た - different from body Y1233F を, SF/HGF の target cells で あ る マ ウ ス · メ ラ ノ ー マ cell lines B16 - F1 に 発 now さ せ, each 発 now let body cells の EGF に す seaborne る 応 と each answer by let body の チ ロ シ ン · キ ナ ー ゼ active に つ い て parsing し た. All the 発 now let body cells の EGF に す seaborne る 応 answer を adjustable べ た results, EMR 発 now cell は EGF stimulation に よ り cells ど う し が mutual い に dispersion し, ま た そ の motility が hyperthyroidism し て い た. Youdaoplaceholder0 れに against the variant receptor-producing cells of <s:1> K1108A and Y1223F で EGFに against する応 観 観 observe されな されな った った. 発 now cells を EGF stimulation し た の each by the capacity of body の チ ロ シ ン himself リ ン acidification を adjustable べ た results, K1108A の リ ン acidification は 検 out さ れ ず, Y1223F の リ ン acidification も EMR の そ れ の about 4% low に し て い た. Immune sink し の た by each let body in vitro で の キ ナ ー ゼ active を ミ エ リ ン を salt basic protein matrix と し て determination し た results, K1108A の activity は total く 検 out さ れ ず, Y1223F の active も EMR の そ れ の about 3% に ま で low し て い た. さ ら に 発 now cells を EGF stimulation し た の の intracellular protein チ ロ シ ン · リ ン acidification を resistance ホ ス ホ チ ロ シ ン antibody に よ る イ ム ノ ブ ロ ッ テ ィ ン グ で parsing し た results, EMR 発 now cell に お い て 観 examine さ れ た molecular weight 115 kda と 110 kda protein の の リ ン acidification は, K1108A, お よ び Y1 223F cells で で 検 検 emerge されな った った. の above results よ り, SF/HGF の cells scattered, motor hyperfunction の シ グ ナ ル は c - Met の intracellular domain の チ ロ シ ン · キ ナ ー ゼ activeness に よ り 伝 da さ れ る こ と, そ し て そ の チ ロ シ ン · キ ナ ー ゼ activeness に は mainly their リ ン acidification parts (Tyr - 1233) の チ ロ シ ン · リ ン acidification が important Youdaoplaceholder0 cut を fruit た て る る とが とが show された.

项目成果

Komada,M.: "The cell dissociation and motility triggered by scatter factor/hepatocyte growth factor are mediated through the cyteplasmic domain of the c-Met receptor" Oncogene. 8. 2381-2390 (1993)

Komada,M.：“由散射因子/肝细胞生长因子触发的细胞解离和运动是通过 c-Met 受体的细胞质结构域介导的”Oncogene。

Tsuneoka,M.: "Evidence for involvement of furin in cleavage and activation of diphthelia toxin" J.Biol.Chem.268. 26461-26465 (1993)

Tsuneoka,M.：“弗林蛋白酶参与白喉毒素裂解和激活的证据”J.Biol.Chem.268。