c-Metチロシン・キナーゼを介した細胞内情報伝達機構の解析

c-Met酪氨酸激酶介导的细胞内信号转导机制分析

基本信息

批准号：
05780538
负责人：
駒田雅之
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Scatter factor/hepatocyte growth factor(SF/HGF)の細胞分散、細胞運動性亢進作用のシグナル伝達における、その受容体c-met癌原遺伝子産物(c-Met)の細胞内チロシン・キナーゼ領域の機能を明かにするために、上皮細胞増殖因子(EGF)受容体の細胞外領域とc-Metの細胞内領域からなるキメラ受容体EMR、およびEMRの細胞内c-Metチロシン・キナーゼのATP結合部位であるLys-1108をAlaに置換した変異受容体K1108A、主要自己リン酸化部位であるTyr-1233をPheに置換した変異受容体Y1233Fを、SF/HGFの標的細胞であるマウス・メラノーマ細胞株B16-F1に発現させ、各受容体発現細胞のEGFに対する応答と各受容体のチロシン・キナーゼ活性について解析した。各受容体発現細胞のEGFに対する応答を調べた結果、EMR発現細胞はEGF刺激により細胞どうしが互いに分散し、またその運動性が亢進していた。これに対しK1108A、Y1223F変異受容体発現細胞ではEGFに対する応答は観察されなかった。発現細胞をEGF刺激した時の各受容体のチロシン自己リン酸化を調べた結果、K1108Aのリン酸化は検出されず、Y1223Fのリン酸化もEMRのそれの約4%に低下していた。免疫沈降した各受容体のin vitroでのキナーゼ活性をミエリン塩基性蛋白を基質として測定した結果、K1108Aの活性は全く検出されず、Y1223Fの活性もEMRのそれの約3%にまで低下していた。さらに発現細胞をEGF刺激した時の細胞内蛋白質のチロシン・リン酸化を抗ホスホチロシン抗体によるイムノブロッティングで解析した結果、EMR発現細胞において観察された分子量115kDaと110kDaの蛋白質のリン酸化は、K1108A、およびY1223F発現細胞では検出されなかった。以上の結果より、SF/HGFの細胞分散、運動性亢進作用のシグナルはc-Metの細胞内領域のチロシン・キナーゼ活性化により伝達されること、そしてそのチロシン・キナーゼ活性化には主要自己リン酸化部位(Tyr-1233)のチロシン・リン酸化が重要な役割を果たしていることが示された。

散射因子/肝细胞生长以阐明受体C-MET原型原原癌基因（C-MET）在信号细胞分散和细胞运动性（SF/HGF）中的细胞内酪氨酸激酶区域（C-MET）的功能，我们已经得出结论，结论是嵌合受体EMR的内在成长（Epracter emer）的e egf）。 EMR和EMR的酪氨酸激酶。突变受体K1108A（其中Lys-1118（ATP结合位点）被ALA取代，而突变的受体Y1233F，其中Tyr-1233（主要的自磷酸化位点）在小鼠黑色素瘤细胞系B16-F1中表达了主要的自磷酸化位点，用于SF/HGF的目标细胞和ES-egf的目标细胞，均为sf/hgf的目标细胞，均为egf和egf的响应。分析了每个受体的。由于检查了每个表达受体的细胞对EGF的反应，因此通过EGF刺激增强了表达EMR的细胞及其运动之间的表达细胞。相反，在表达K1108A和Y1223F突变受体的细胞中未观察到EGF的反应。当刺激表达细胞时，研究了每个受体的酪氨酸自磷酸化，未检测到K1108a的磷酸化，Y1223F的磷酸化也降低至EMR的磷酸化。使用髓磷脂碱性蛋白作为底物测量了每个免疫沉淀受体的体外激酶活性，根本没有检测到Y1223F的活性，并将Y1223F的活性降低至EMR的活性。此外，当用抗磷酸酪氨酸抗体进行免疫印迹刺激EGF时，细胞内蛋白的酪氨酸磷酸化表明，在k1108a和y1108a中未检测到在EMR表达细胞中观察到的分子量为115 kDa和110 kDa的蛋白的磷酸化在EMR表达细胞中观察到110 kDa。以上结果表明，SF/HGF的细胞分散和运动过度动力的信号是通过酪氨酸激酶在C-MET的细胞内区域传播的，并且在大型自磷酸化位点（Tyr-1233）对酪氨酸磷酸化（Tyry-1233）在酪氨酸激活中起重要作用。