神経細胞の軸索起始部とランビエ節への電位依存性Naチャネル局在化機構

电压门控Na通道定位于神经元轴突起点和Ranvier节点的机制

• 批准号: 15016043
• 负责人: 駒田 雅之
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15016043/
• 关键词: 神経細胞; 電位依存性Naチャネル; アンキリン; スペクトリン; 細胞膜骨格; 軸索; 軸索起始部; ランビエ節

βIV-スペクトリン・アイソフォームΣ6の機能βIV-スペクトリンの全長型アイソフォームΣ1と、N末端側の約半分の領域を欠くアイソフォームΣ6の各々の機能を解明するため、Σ1の発現のみをノックアウトしたマウスを作製した。脳ライセートを用いたウエスタンブロット解析の結果、このマウスではΣ1の発現がないこと、そしてΣ6の発現は正常であることが確認できた。そこでこのマウスを用いて解析を行い、以下の結果を得た。(1)脳、座骨神経の切片を抗βIV-スペクトリン抗体で免疫蛍光染色した結果、Σ6はΣ1非依存的に軸索起始部とランビエ節に局在できることが明らかとなった。(2)脳、座骨神経の切片を電位依存性NaチャネルおよびアンキリンGに対する抗体で免疫蛍光染色した結果、このマウスでは、以前に解析したΣ1とΣ6をともに欠失したマウスと同様のレベルで軸索起始部とランビエ節におけるNaチャネルとのアンキリンGの局在が低下していた。このことからNaチャネルとのアンキリンGの局在安定化にはΣ1が主要な役割を果たしていることが示唆された。βIV-スペクトリンの可変領域に結合する蛋白質の同定酵母two-hybrid法によりβIV-スペクトリンの可変領域結合蛋白質として同定された14-3-3蛋白質が、哺乳類細胞の中でもβIV-スペクトリンと結合しているかどうかを、マウス脳のおよび両蛋白質を過剰発現させた培養細胞のライセートを用いた共免疫沈降法によって調べた。しかし結合を検出することができなかった。βIV-スペクトリンのランビエ節への膜蛋白輸送における機能14-3-3蛋白質がキネシンとβIV-スペクトリンをつなぐアダプターとして、βIV-スペクトリンとその結合蛋白質の軸索輸送に関与しているか調べるため、初代培養神経細胞にトランスフェクションによりβIV-スペクトリンおよびその変異体を発現させる系を確立した。

Beta IV - ス ペ ク ト リ ン · ア イ ソ フ ォ ー ム Σ 6 の function beta IV - ス ペ ク ト リ ン の full-sized ア イ ソ フ ォ ー ム Σ 1 の と, N terminal side of about half a cent の field を owe く ア イ ソ フ ォ ー ム Σ 6 の each 々 の function を interpret す る た め, 1 の Σ 発 is の み を ノ ッ ク ア ウ ト し た マ ウ ス を cropping し た. 脳 ラ イ セ ー ト を with い た ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト analytical の results, こ の マ ウ ス で は Σ 1 の 発 now が な い こ と, そ し て Σ 6 の is は 発 the normal で あ る こ と が confirm で き た. Youdaoplaceholder0 そ で で で そ で ウスを ウスを ウスを ウスを use the そ て to analyze the を line を, and the following <s:1> result を gives た. (1) 脳, bone god 経 の slice を beta IV - resistant ス ペ ク ト リ で ン antibody immune 蛍 light staining し た results, Σ 6 は Σ 1 not dependent に axon starting department と ラ ン ビ エ に bureau in で き る こ と が Ming ら か と な っ た. (2) 脳, bone god 経 の slice を potential dependency Na チ ャ ネ ル お よ び ア ン キ リ ン G に す seaborne で る antibody immune 蛍 light staining し た results, こ の マ ウ ス で に は, before parsing し た Σ 1 と Σ 6 を と も に owe lost し た マ ウ ス と with others の レ ベ ル で axon starting department と ラ ン ビ エ section に お け る Na チ ャ ネ ル と の ア ン キ リ ン G の The bureau is located at が and below て て た た. こ の こ と か ら Na チ ャ ネ ル と の ア ン キ リ ン G の bureau in stabilization に は Σ 1 が main な "を cut fruit た し て い る こ と が in stopping さ れ た. Beta IV - ス ペ ク ト リ ン の can be combined - field に す の る proteins with fixed yeast two hybrid method に よ り beta IV - ス ペ ク ト リ ン の binding protein can - field と し て with fixed さ れ が た 14-3-3 proteins, in mammalian cells の で も beta IV - ス ペ ク ト リ ン と combining し て い る か ど う か を, マ ウ ス 脳 の お よ び ever struck protein を turning 発 now さ せ た culture cell の ラ イ セ ー ト を with い た were immune to sink method に よ っ て adjustable べ た. The combination of を検, する, とがで, とがで, な, った and った gives the result. Beta IV - ス ペ ク ト リ ン の ラ ン ビ エ section へ の membrane protein transport に お け る functional protein 14-3-3 が キ ネ シ ン と beta IV - ス ペ ク ト リ ン を つ な ぐ ア ダ プ タ ー と し て, beta IV - ス ペ ク ト リ ン と そ の binding protein の axonal transport に masato and し て い る か adjustable べ る た め, early training resting to restore energy 経 cell に ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン に よ り beta IV - ス ペ ク ト リ ン お よ び そ の - variant を 発 now さ せ を る department establish し た.

项目成果

Kunzmann, S.: "SARA and Hgs attenuate susceptibility to TGF-β1-mediated T cell suppression."FASEB Journal. 17. 194-202 (2003)

Kunzmann, S.：“SARA 和 Hgs 减弱对 TGF-β1 介导的 T 细胞抑制的敏感性。”FASEB 杂志 17. 194-202 (2003)

Morino, C.: "A role for Hrs in endosomal sorting of ligand-stimulated and unstimulated epidermal growth factor receptor."Experimental Cell Research. (in press). (2004)

Morino, C.：“Hrs 在配体刺激和未刺激的表皮生长因子受体的内体分选中的作用。”实验细胞研究。

Mizuno, E.: "Association with Hrs is required for the early endosomal localization, stability, and function of STAM"Journal of Biochemistry. 135. 385-396 (2004)

Mizuno, E.：“STAM 的早期内体定位、稳定性和功能需要与 Hrs 的关联”《生物化学杂志》。

Mizuno, E.: "STAM proteins bind ubiquitinated proteins on the early endosome via the VHS domain and ubiquitin-interacting motif."Molecular Biology of the Cell. 14. 3675-3689 (2003)

Mizuno, E.：“STAM 蛋白通过 VHS 结构域和泛素相互作用基序结合早期核内体上的泛素化蛋白。”细胞的分子生物学。