c-Met受容体を介した細胞内情報伝達におけるチロシンリン酸化蛋白質の役割

酪氨酸磷酸化蛋白在 c-Met 受体细胞内信号转导中的作用

• 批准号: 06780591
• 负责人: 駒田 雅之
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780591/
• 关键词: 肝細胞増殖因子; c-met癌原遺伝子産物; シグナル伝達; チロシン・キナーゼ; チロシン・リン酸化; ジンク フィンガー

我々は、hepatocyte growth factor(HGF)で細胞を刺激した時に分子量約115kDaの蛋白質(p115)が強くチロシン・リン酸化されることを見出している。したがってp115はHGFの細胞内シグナル伝達において何らかの役割を果していると予想される。しかしp115はいくつかの既知のチロシン・リン酸化蛋白質に対する抗体と反応しないことから、新規蛋白質である可能性が考えられた。そこで本研究ではp115の構造と機能を明らかにするために、その精製、およびcDNAクローニングを行った。HGFで刺激したマウス・メラノーマ細胞株B16-F1から、抗ホスホチロシン抗体カラムとプレパラテイブSDS-PAGEの2ステップでp115を精製し、プロテアーゼ処理によって得られた6個のフラグメントのアミノ酸配列を決定した。これらの配列は既知の蛋白質と相同性を有しておらず、p115が新規蛋白質であることが示された。そこでこれらの配列をもとにオリゴヌクレオチド・プライマーを合成し、PCR法でp115cDNAを増幅した。そしてこのPCR産物をプローブとしてマウスのcDNAライブラリーをスクリーニングして完全長のcDNAを得た。このcDNAは775個のアミノ酸からなる蛋白質をコードしていた。一次構造上の特徴として、タンデムにつながった2個のZnフインガー領域、プロリンに富む領域、そしてプロリンおよびグルタミンに富む領域を有していたが、それ以外に既知のドメイン構造とのホモロジーは見出されなかった。ノーザン・ブロット解析の結果、p115のmRNAは3.0kbであり、調べた限りのすべてのマウスの組織、さらにマウス胎児においても発現していることが明らかとなった。以上の結果から、p115はHGFの細胞内シグナル伝達においてユニークな役割を果たす因子であることが示唆された。

We use hepatocyte growth factor (HGF) as a cell-stimulating protein (p115) with a molecular weight of approximately 115 kDa as a strong acidified protein.したがってp115はHGFの intracellular シグナル伝达において何らかのServant cut を Fruit していると yu want to される.しかしp115はいくつかの知のチロシン・リンacidified protein に対すAntibodies and anti-antibodies are available, and new proteins are available for testing.そこでThis study is about the structure and function of ではp115, を明らかにするために, そのrefining, およびcDNA クローニングを行った. HGF-stimulated したマウス・メラノーマcell line B16-F1から, anti-ホスホチロシン antibody カラムとプレパラテイブSDS-PA GEの2ステップでp115をrefinedし、プロテアーゼprocessedによって got られた6 pieces of のフラグメントのアミノacid combination をdetermined した.これらのalignment はKnown proteins とidentity しておらず, p115 がnew regulation protein であることが Show された. The synthesis of そこでこれらのをもとにオリゴヌクレオチド・プライマーを is done by PCR method.そしてこのPCR product をプローブとしてマウスのcDNAライブラリーをスクリーニングしてFull-length cDNAを得た.このcDNAは775のアミノ acid からなるprotein をコードしていた. One time structure, 2 special Z nフインガー区, プロリンに富む区, そしてプロリンおよびグルタミンに富む区を有していたが、それにThe structure of the known structure and the structure of the structure are known.ノーザン・ブロットanalytical results, p115のmRNAは3.0kbであり, adjustedべたlimitりのすべてのマウスのorganization, さらにマウス fetal 児においても発开灗ていることが明らかとなった. The above results show that p115 and p115 HGF intracellular factors are the same.

项目成果

M.Komada: "Regulatory role of major tyrosine autophoshorylation site of kinase domain of c-Met receptor ( scatter factor/hepatocyte growth factor receptor )." J.Biol.Chem.269. 16131-16136 (1994)

M.Komada：“c-Met 受体（分散因子/肝细胞生长因子受体）激酶结构域主要酪氨酸自磷酸化位点的调节作用。”