増殖因子の細胞内情報伝達における115kDaチロシンリン酸化蛋白質の役割

115kDa酪氨酸磷酸化蛋白在生长因子细胞内信号转导中的作用

• 批准号: 07780635
• 负责人: 駒田 雅之
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780635/
• 关键词: 増殖因子受容体; シグナル伝達; チロシンキナーゼ; チロシンリン酸化; ジンクフィンガー; エンドソーム; 早期エンドソーム; 小胞輸送

HrsのZinc finger 領域は、高等動物や酵母におけるendosomeやvacuoleなどの細胞内小胞間の蛋白質輸送に関与するいくつかの蛋白質(EEA1、Fab1、Vps27、Vac1など)のzinc finger領域と50%近い相同性を有している。さらにHrsとVps27が全体で23%の相同性をもつことも見出された。したがってHrsも細胞内小胞輸送に関与している可能性が考えられた。そこで本研究では、Hrsの細胞内局在部位の同定を行った。Hemagglutinin(HA)epitopeのタグをつけたHrsをHeLa細胞に発現させ、抗HA抗体を用いた間接蛍光抗体法でHrsの局在部位を検出した。その結果、Hrsは細胞内の小胞状構造に局在していた。この局在パターンは、早期endosomeのマーカーであるtransferrin receptorのそれと完全に一致しており、後期endosomeのマーカーであるCD63のそれとは部分的にしか一致しなかった。したがって、Hrsは早期endosome局在蛋白であることが明らかとなった。また細胞分画によってHrsは可溶性画分と膜画分にはほぼ等量ずつ回収されたが、膜画分のHrsもアルカリ処理により上清に溶出されてくることから、Hrsは早期endosomeとゆるく結合していることが予想された。一方、zinc finger 領域を欠失させたHrsの変異体もまたtransferrin receptorと同じ細胞内局在パターンを示し、zunc finger 領域はHrsの正しい細胞内局在には必要ないことが示された。以上、Hrsが早期endosomeに局在すること、および酵母のendosomeからvacuoleへの蛋白質の小胞輸送に必須の因子Vps27と蛋白質全体に渡って相同性を有していることから、Hrsは、細胞内にインターナライズし早期endosomeに運ばれた増殖因子/受容体tyrosinekinase複合体によって早期endosome上でリン酸化され、その複合体の後期endosome、lysosomeへの輸送に関わっている可能性が考えられた。

Hrs <s:1> Zinc finger domain, higher animals や yeast におけるendosomeやvacuoleな <s:1> <s:1> intracellular intercellular <s:1> protein transport に related to する する く く く <s:1> <s:1> proteins (EEA1, Fab1, Vps27, Vac1な <e:1>) <s:1> zinc In the finger domain, と50% similar to と are を and て る る. Youdaoplaceholder0 HrsとVps27が total で23% <s:1> similarity を された と と と と と と された is found in された. Youdaoplaceholder0 たがってHrs に intracellular cellular transport に is related to <s:1> て る る possibility が examines えられた. In this study, the intracellular localization sites of で で and Hrs are <s:1> fixed in を rows った. Hemagglutinin (HA) epitope の タ グ を つ け た Hrs を HeLa に 発 now さ せ, anti HA antibody を い た 蛍 indirect light antibody technique で Hrs の bureau in parts を 検 out し た. Youdaoplaceholder0 そ result, Hrs そ intracellular <s:1> small cellular structure に is localized in <s:1> て た た た た. こ の bureau in パ タ ー ン は, early endosome の マ ー カ ー で あ る transferrin receptor の そ れ と に completely consistent し て お り, late endosome の マ ー カ ー で あ る CD63 の そ れ と は part of に し か consistent し な か っ た. Youdaoplaceholder0 たがって Hrs early endosomes are located in the protein である とが ら ら となった. ま た cells points draw に よ っ て Hrs は soluble paint points と membrane points に は ほ ぼ equivalent ず つ back 収 さ れ た が, membrane draw points の Hrs も ア ル カ リ 処 Richard に よ り supernatant に dissolution さ れ て く る こ と か ら, Hrs は early endosome と ゆ る く combining し て い る こ と が to think さ れ た. A party, any zinc finger domain を owe lost さ せ た Hrs の - variant も ま た transferrin receptor と with じ cells inside bureau in パ タ ー ン を し, zunc finger domain は Hrs の is し い cells inside bureau in に は necessary な い こ と が shown さ れ た. Above, Hrs が early endosome に bureau in す る こ と, お よ び yeast の endosome か ら vacuole へ の protein の vesicular transport に must の factor Vps27 protein と all に crossing っ て in same-sex を have し て い る こ と か ら, Hrs は, intracellular に イ ン タ ー ナ ラ イ ズ し endosom early E に luck ば れ た raised colonization factor/by let body tyrosinekinase complex に よ っ て on early endosome で リ ン acidification さ れ, そ の complex の late endosome, lysosome へ の conveying に masato わ っ て い る possibility が exam え ら れ た.

项目成果

Komada, M: "Growth factor-induced tyrosine phosphorylation of Hrs, a novel 115-kilodalton protein with a structurally conserved putative zinc finger domain." Molecular and Cellular Biology. 15. 6213-6221 (1995)

Komada, M：“生长因子诱导的 Hrs 酪氨酸磷酸化，Hrs 是一种新型 115 千道尔顿蛋白质，具有结构保守的推定锌指结构域。”