増殖因子の細胞内情報伝達における115kDaチロシンリン酸化蛋白質の役割

115kDa酪氨酸磷酸化蛋白在生长因子细胞内信号转导中的作用

• 批准号: 07780635
• 负责人: 駒田 雅之
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780635/
• 关键词: 増殖因子受容体; シグナル伝達; チロシンキナーゼ; チロシンリン酸化; ジンクフィンガー; エンドソーム; 早期エンドソーム; 小胞輸送

HrsのZinc finger 領域は、高等動物や酵母におけるendosomeやvacuoleなどの細胞内小胞間の蛋白質輸送に関与するいくつかの蛋白質(EEA1、Fab1、Vps27、Vac1など)のzinc finger領域と50%近い相同性を有している。さらにHrsとVps27が全体で23%の相同性をもつことも見出された。したがってHrsも細胞内小胞輸送に関与している可能性が考えられた。そこで本研究では、Hrsの細胞内局在部位の同定を行った。Hemagglutinin(HA)epitopeのタグをつけたHrsをHeLa細胞に発現させ、抗HA抗体を用いた間接蛍光抗体法でHrsの局在部位を検出した。その結果、Hrsは細胞内の小胞状構造に局在していた。この局在パターンは、早期endosomeのマーカーであるtransferrin receptorのそれと完全に一致しており、後期endosomeのマーカーであるCD63のそれとは部分的にしか一致しなかった。したがって、Hrsは早期endosome局在蛋白であることが明らかとなった。また細胞分画によってHrsは可溶性画分と膜画分にはほぼ等量ずつ回収されたが、膜画分のHrsもアルカリ処理により上清に溶出されてくることから、Hrsは早期endosomeとゆるく結合していることが予想された。一方、zinc finger 領域を欠失させたHrsの変異体もまたtransferrin receptorと同じ細胞内局在パターンを示し、zunc finger 領域はHrsの正しい細胞内局在には必要ないことが示された。以上、Hrsが早期endosomeに局在すること、および酵母のendosomeからvacuoleへの蛋白質の小胞輸送に必須の因子Vps27と蛋白質全体に渡って相同性を有していることから、Hrsは、細胞内にインターナライズし早期endosomeに運ばれた増殖因子/受容体tyrosinekinase複合体によって早期endosome上でリン酸化され、その複合体の後期endosome、lysosomeへの輸送に関わっている可能性が考えられた。

The Zinc finger domain of Hrs is 50% identical to the Zinc finger domain of higher animals, yeast, endosome, vacuole, and proteins (EEA1, Fab1, Vps27, Vac1) involved in intracellular protein transport. Hrs and Vps27 are 23% identical. The possibility of intracellular vesicle transport is examined. In this study, Hrs and Hrs are located in the same cell. Hemagglutinin(HA)epitope was detected in HeLa cells, and anti-HA antibodies were detected in Hrs by indirect fluorescent antibody method. As a result, Hrs cells are small cellular structures in the cells. The early endosome is completely consistent with the late endosome, and the CD63 is completely consistent with the late endosome.したがって、Hrsは早期endosome局在蛋白であることが明らかとなった。Cell separation, membrane separation, and dissolution of supernatant. A zinc-finger field is missing, and a transferrin receptor is needed. As mentioned above, Hrs is an essential factor for early endosome protein transport in vacuole cells, Vps27, and the identity of all protein transitions. Hrs is an intracellular factor for early endosome protein transport in vacuole cells. Hrs is an intracellular factor for early endosome protein transport in vacuole cells. Lysosome transport is possible.

项目成果

Komada, M: "Growth factor-induced tyrosine phosphorylation of Hrs, a novel 115-kilodalton protein with a structurally conserved putative zinc finger domain." Molecular and Cellular Biology. 15. 6213-6221 (1995)

Komada, M：“生长因子诱导的 Hrs 酪氨酸磷酸化，Hrs 是一种新型 115 千道尔顿蛋白质，具有结构保守的推定锌指结构域。”