リンパ球初期分化因子の単離と同定

早期淋巴细胞分化因子的分离与鉴定

• 批准号: 05857038
• 负责人: 田合 ひろみ
• 金额: $ 0.45万
• 依托单位: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05857038/
• 关键词: RAG-1; ストローマ細胞; リンパ球初期分化

1.ヒトRAG-1mRNA発現検出法の確立RT-PCR法による検出は高感度であるが、非特異的な反応も起こりやすい。我々は、種々の条件を検討し、RAG-1mRNA発現を高感度かつ特異的に検出する方法を確立した。条件は次のとおりである。センスプライマー:1-20、アンチセンスプライマー:213-232、アニーリング:55℃2分、サイクル数:30この系を用いて、正常細胞および血液系細胞株におけるRAG-1の発現を検索したところ、胸線、骨髄・臍帯血中の単核球、プレB細胞株(Nalm6)、T細胞株(CEM)といった未熟リンパ組織でRAG-1の発現が見られた。また、我々の樹立したヒトリンパ球前駆細胞株(FL細胞)においてはRAG-1mRNAの発現は見られず、FL細胞がRAG-1を発現する以前の細胞であることがわかった。2.FL細胞に対するRAG-1発現誘導マウスストローマ細胞株であるPA-6と共培養することによって、FL細胞にRAG-1の発現が誘導された。このRAG-1発現の誘導にはサイトカインの存在が必要であり、そのサイトカインがIL-3、IL-6、IL-7であることを明らかにした。これらは各々単独でもRAG-1の発現を誘導するが、三者が共存するとより強い誘導活性を示す。この系で、メンブレンフィルターを用いてFL細胞とPA-6との物理的接触を阻害するとRAG-1発現誘導は全く見られなくなる。またマウス線維芽細胞NIH3T3との共培養ではRAG-1は誘導されない。これらのことからFL細胞に対するR発現誘導にはサイトカインとPA-6細胞膜上の分子からのシグナルが必要であることが明らかになった。

1. RAG-1mRNA expression assay was established by RT-PCR to detect high sensitivity and non-specific anti-RAG-1 mRNA expression. We have established a highly sensitive and specific detection method for RAG-1mRNA expression by investigating the conditions for its production. The condition is reversed. RAG-1 development was detected in normal cells and blood line cell lines, breast line, bone marrow, umbilical cord blood, B cell line (Nalm6), T cell line (CEM) and immature tissue. RAG-1mRNA expression in FL cells was detected in the cells before RAG-1 expression in FL cells. 2. Induction of RAG-1 in FL cell lines by PA-6 and co-culture The RAG-1 was developed and induced to exist in the presence of IL-3, IL-6 and IL-7. The expression of RAG-1 was induced by three different enzymes, and the expression of RAG-1 was induced by three enzymes. This system is used to inhibit the physical contact between FL cells and PA-6 cells, and RAG-1 cells are induced to react. RAG-1 was induced in co-culture of NIH 3T3 cells. The expression of these molecules on the membrane of PA-6 cells is essential.