抗体による特異的構造認識を利用したシガトキシンの絶対構造決定

利用抗体的特异性结构识别确定雪卡毒素的绝对结构

• 批准号: 06780458
• 负责人: 佐々木 誠
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780458/
• 关键词: シガテラ; シガトキシン; 絶対構造; JKLM環部; ハプテン; 抗原抗体反応; ハプテンアルブミンコンジュゲート

食中毒シガテラの主要原因毒シガトキシン(CTX1B)およびその類縁体は、強力で特異的に細胞膜ナトリウムチャネルを活性化する脂溶性ポリエーテル化合物であり、チャネル蛋白の機能解明のための研究試薬としての需要が高まりつつある。しかし、その絶対構造は未定である。本研究では、抗原抗体反応の高い親和性と厳密な抗原特異性を利用してCTX1Bの絶対構造を決定することを目的とした。すなわち、両鏡像体が入手可能な糖質化合物を出発原料としてCTX1BのJKLM環部フラグメントの両鏡像体を立体選択的に合成し、それらをハプテンとする抗体と天然のCTX1Bとの交差反応性を検討することによって、CTX1Bの絶対構造を決定することを目的とした。1.シガトキシンJKLM環部の合成:環状エーテルが13個梯子状に連なったCTX1Bの構造のうち既製の単クローン抗体が精密構造認識していると推定される右単部4環(JKLM環)を含む部分構造を本研究の合成標的とした。すでにD-グルコースを出発原料としてCTX1BのKLM環部の立体選択的合成を完了しているが、さらにJ環部を伸長し、四環性のJKLM環部フラグメントを立体選択的に合成した。この際、鍵反応であるK環部7員環エーテル環形成反応および各段階の反応条件の最適化を行い、効率的合成経路を確立した。2.シガトキシンJKLM環部の光学対象体の合成:L-グルコースを出発原料として用い、1.で確立した合成経路に従いJKLM環部の光学対象体を立体選択的に合成した。3.抗原の調製:以上のようにして合成したJKLM環部フラグメントとその光学対象体をそれぞれカルボン酸へと誘導し、活性エステル化法により牛血清アルブミン(BSA)のリジン残基に結合させ、ハプテンアルブミンコンジュゲートの合成に成功した。こうして得たコンジュゲートのアルブミン1分子当たりのハプテンの結合数は10分子以上であり、免疫に必要なハプテン価として十分であることが分かった。

The main cause of food poisoning is toxin (CTX1B), which is a kind of lipid soluble compound that is active in cell membrane and active in cell membrane. The structure is uncertain. The purpose of this study is to determine the high affinity and specificity of CTX1B antibodies. The synthesis and characterization of glycans from CTX-1B and CTX-1B are discussed in detail. 1. The synthesis of JKLM ring: 13 ladder-like rings, CTX1B structure, prepared ring antibody, precise structure recognition, estimation, right ring, 4 rings (JKLM ring), including the structure of JKLM ring, is the subject of this study. The stereoselective synthesis of the D-ring-derived raw material CTX1B and the stereoselective synthesis of the J-ring-derived tetracyclic JKLM has been completed. The optimization of the reaction conditions of each stage and the establishment of the synthesis circuit of the efficiency are carried out. 2. Synthesis of optical object of JKLM ring part: L-group optical object is used to generate raw materials; 1. Synthesis circuit is established to synthesize optical object of JKLM ring part. 3. Antigen modulation: The synthesis of JKLM ring moiety and its optical target was successfully carried out by acid induction and active chemical method, and bovine serum albumin (BSA) was successfully synthesized by binding to its free residues. The number of molecules bound to each other is more than 10 molecules, and the number of molecules bound to each other is more than 10 molecules.

项目成果

Makoto Sasaki: "Synthetic Studies toward Ciguatoxin.Stereocontrolled Construction of the KLM Ring Fragment." The Journal of Organic Chemistry. 59. 715-717 (1994)

Makoto Sasaki：“雪卡毒素的合成研究。KLM 环片段的立体控制构建。”

Makoto Sasaki: "Synthesis of a Tetracyclic Fragment of Ciguatoxin toward Preparation of an Artifical autigan for Ciguatoxin Immunoassay." Proceeding for International Symposium on Ciguatera and Marine Natural Products. (in press). (1995)

Makoto Sasaki：“合成雪卡毒素四环片段，以制备用于雪卡毒素免疫测定的人工autigan。”