Identifizierung und funktionelle Charakterisierung der molekularen Umgebung (Mikrodomäne) kalziumgesteuerter `small conductance` (SK) Kaliumkanäle

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Das Saccharomyces cerevisiae Gen ISC1 kodiert für eine Sphingomyelinase-ähnliche Phosphoinositol Sphingolipid Phospholipase C. Die gezielte Inaktivierung des Enzyms in Disc1 Nullmutanten führt zu einer deutlich herabgesetzten Toleranz der Zellen gegenüber NaCl oder LiCl Salzstress. Im vorliegenden Projekt soll die Rolle der ISC1-kodierten Phospholipase innerhalb der durch Salzstress ausgelösten und letztendlich zur Induktion einer Na+/Li+-Exportpumpe führenden Signalkette untersucht werden. In diesem Zusammenhang soll zunächst das komplexe Gemisch der in Hefezellen vorhandenen Sphingolipide möglichst weitgehend aufgetrennt werden. Anschließend sollen die einzelnen Komponenten auf ihre Eigenschaft, als Isc1p-Substrat zu fungieren, untersucht werden. Für diese Studien sollen als Enzympräparation außer partiell gereinigten Membranfunktionen von Wildtyp- und Disc1-Mutantenzellen auch affinitätschromatographisch angereicherte Präparationen von Isc1p eingesetzt werden. Die Ergebnisse sollen als Grundlage für die Studien zur Art des extrazellulären Sensors und zum Mechanismus der Signalweitergabe innerhalb der Zelle dienen.