ヒト血管内皮型一酸化窒素合成酵素遺伝子およびそのプロモーター活性の解析

人内皮一氧化氮合酶基因及其启动子活性分析

• 批准号: 06770496
• 负责人: 宮原 馨
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kochi Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770496/
• 关键词: 血管内皮; NO合成酵素; 遺伝子構造; プロモーター; Sp1結合配列

ヒト血管内皮型一酸化窒素(NO)合成酵素遺伝子の構造解析から、21kbにわたって存在する26個のエクソンから成ることがわかった。5'上流域にはTATAboxはなく、GC含量が高いハウスキーピングな遺伝子の特徴を有していた。この遺伝子の2.2kb上流域のプロモーター活性をCATアッセイにより解析してみると、-2200から-283までの領域においては、活性の変動がほとんどみられなかった。しかし、-97までしか含まない領域においては、活性は急激に低下し、ベイサルレベルであった。TATA配列及びCAT配列がこの遺伝子の上流に存在せずに、-104にはSp1結合配列が存在していることから、Sp1結合配列を含む100bp上流領域が、コア・プロモーターとして働いていることが解る。ヒト臍帯静脈由来の血管内皮細胞(HUE-2)を、リポポリサッカライド(LPS)(100μg/ml),IFN-γ(10u/ml),IL-1β(10ng/ml),TNF-α(10ng/ml)で24時間処理したが、NO合成酵素のmRNAの量の変動は検出されなかった。また、従来、閉経後の女性では高血圧症になりやすいことから、エストロゲンがNOの産生を誘導していると考えられ、ラットでは、エストロゲンの投与によりNOの産生がみられている。しかし、我々は、この細胞をβ-estradiol(0.25-1.0ng/ml)で24時間処理したが、mRNAの特異的な上昇はみられなかった。血管平滑筋細胞では、様々なサイトカインで処理するとNO産生が上昇するが、この細胞自身がNO合成酵素の遺伝子が転写活性をあげていることによることが、近年、解ってきた。我々の結果から、内皮細胞はこうしたサイトカインではこの遺伝子の活性に影響せず、従来言われてきたNO産生の上昇は、もしかすると平滑筋細胞が混在していたのかもしれないし、また、種による違いも考えられる。エストロゲンによるこの遺伝子の活性化も、in vitroにおいては相矛盾する結果が報告されているが、活性化されても、せいぜい2倍程度の上昇がみられるだけである。

Vascular endothelial asphyxiated asphyxiate (NO) synthetic enzyme fragment was constructed and analyzed, and there were 26 mice in the 21kb assay. 5'in the upper basin, there is a high content of TATAbox and GC in the upper basin. On the 2.2kb, there is a significant increase in the level of activity in the river basin. in the river basin, there is a significant increase in the level of activity in the river basin. on the 2.2kb, there is a high level of activity in the river basin. in the river basin, there is a high level of activity in the river basin. in the 2.2kb, there is a significant increase in the level of activity. The number of people in the field is low, the activity is low, and the temperature is low in the field. The upper stream of the TATA configuration and the CAT configuration contains the data stream, the Sp1 configuration column contains the 100bp upstream domain, the Sp1 configuration column contains the 100bp upstream domain, and the Sp1 configuration column contains the 100bp upstream domain. HUE-2, LPS (100 μ g